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人源内参基因(GAPDH)核酸检测试剂盒(荧光PCR法)

PR2644
避光-20℃储存
有效期 12 个月
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PR2644 T T ¥3490.00 登录查看

公司产品仅科研研究使用,不得用于临床诊断!

【检测原理】

             人源内参基因(GAPDH)核酸检测试剂盒(荧光PCR法)本试剂盒根据荧光 PCR 技术原理,针对 PCR试剂盒设计特异性引物和 Taqman 探针,通过荧光 PCR 检测仪进行检测,从而实现对 PCR试剂盒的检   测。

【储存条件及有效期】

1. 避光-20℃储存,有效期 12 个月。

2. 低温运输不能超过 4 天;开封后避光-20℃储存,对有效期没有影响。避免反复冻融,冻融 6 次不影响检测效果。

3. 生产日期、有效期至:见外包装盒。

【适用仪器】

             人源内参基因(GAPDH)核酸检测试剂盒(荧光PCR法)适用于 ABI 7500、Bio-Rad CFX96、Roche480 等全自动荧光PCR 检测仪。

【样本要求】

1. 样本种类:鼻/咽拭子、痰液、支气管肺泡灌洗液;培养物等样品。

2. 保存条件:采集的标本应及时送检,24 小时内检测的应 4℃保存,超过 24 小时的最好-70℃保存,并避免反复冻融。

【检测方法】

              1 . 试剂准备(试剂准备区)

将试剂盒各组分置 4℃避光融化,充分混匀后瞬间离心。计算试剂使用份数 N(N=样本数+1 管阳性对照+1 管阴性对照),根据下表配置反应体系mix,加入一适当体积离心管中,充分混匀后瞬间离心,按 20μL 分装至 PCR 反应管/板,并转移至样本处理区。

组分

体积(μL )

qPCR 预混液(含酶)

16

引物探针

4

总体积(反应体系 mix )

20

 

              2 . 样本处理(样本处理区)

                  ① 核酸提取

                  选择合适的核酸提取试剂盒提取核酸,具体按照相应的试剂盒说明书操作。

                  ② 加样

    在已加入反应体系 mix 的 PCR 反应管/板上分别加入处理好的待检标本核酸、阴性对照、阳性对照各 5μL,终体积为 25μL。

                   人源内参基因(GAPDH)核酸检测试剂盒(荧光PCR法)盖紧管盖或封膜,瞬间低速离心后置荧光 PCR 检测仪扩增。

               3 . 扩增检测(核酸扩增区)

步骤

温度

时间

循环数

①预变性

95℃

5min

1cycle

②变性

退火/延伸/检测荧光*

95℃

55℃

10s

40s

40cycles

步骤②中 55℃时荧光检测,检测通道为 FAM。*ABI 系列荧光 PCR 仪不选 ROX 校正,淬灭基团选 None。

4 . 结果分析根据分析后图像调节起止值,(建议起始设在 3~15、终止设在 5~20,同时调整阴性对照的扩增曲线平直或低于阈值线),点击分析,在报告界面查看结果。

【质量控制】

         1.阴性对照:Ct 值>38 或未检出。

         2.阳性对照:扩增曲线呈 S 型,且 Ct 值≤30。

         3.同一实验以上要求需同时满足,否则本次实验视为无效。

         4.每种检测靶标都需设阴阳对照,不同的靶标根据对应阴性调整基线阈值。

【结果判读】

1. FAM 通道检测 B 组链球菌。

2. 阴性:Ct 值>38 或未检出。

3. 阳性:扩增曲线呈 S 型,且 Ct 值≤35。

4. 可疑:扩增曲线呈 S 型,且 35<Ct 值≤38,需复检;复检结果若一致,判定   结果为阳性。

【检验方法的局限性】

1. 样品采集、运输、保存不当,试剂运输、保存、配置不当都可能会影响实验结果,甚至会导致假阴性结果。

2. 如果实验室污染、试剂污染、样品交叉污染,可能出现假阳性结果。

【注意事项】

              1.PCR 操作各阶段应严格分区操作,避免交叉污染。

              2.试剂盒各组分使用前应充分融化混匀,离心数秒后使用。

              3.各组分不得与其他产品或不同批号的相应成分进行互换。

              4.待测标本若不及时检测,应保存于-20℃或-70℃。

              5.样品的处理应该严格按照生物安全规范操作。

              6.PCR 操作人员应具有经验和受过专业培训。

              7.本试剂盒仅用于科研使用,不做为临床诊断使用。

 

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