养细胞这事吧，说简单也简单，说难……那就是真的难。
特别是小鼠原代细胞, 确切地讲, 正是你历经千辛万苦从老鼠肚子里取出, 小心翼翼予以消化, 最终放置到培养皿里, 到了第二天一看, 竟然死掉了一半数量的那种细胞。
最初的时候, 我是满心满脸的懵, 而迄于当下, 我勉强能够养活好几批, 其间, 摔碎了的瓶子, 被浪费掉的试剂, 熬过的夜晚, 讲起来全是泪水。
但今天不是为了卖惨。
只是想要聊一聊, 那些年份当中我饲养小鼠原代细胞时所踩过的坑, 以及一些不走常规途径的小技巧, 并非一定正确, 然而 genuinely确实有所帮助。
为什么我拿到的细胞两天就死了？
这个问题，我当初问过自己一百遍。
后来发觉, 确实不见得是你的问题。好多时候, 是你所获取的那批细胞自身状态就欠佳。
仔细思考一下, 小鼠原代细胞, 它原本就并非是那种经由工厂流水线生产出来的具备标准化特质的产品。它携带着动物的体温, 还有体液，以及各种呈现出不可控状态的生理状况。要知道你从一只刚刚完成疫苗接种、或者刚刚经历过应激反应的小鼠身体上所获取的细胞, 其质量又能好到何种程度呢?
我后来学乖了。
取得细胞之后的首要之事, 并非开展实验, 而是查看状态, 不要急于铺板, 切勿急于加药, 先搁置于显微镜下, 瞧瞧它们的形态、折光度以及有无漂浮起来的死细胞, 要是一开始就看见众多碎片, 那就别白费力气了, 径直联系供应商换货。
真的，别心疼那点时间。
消化这一步，真的不能死磕
消化，是很多人的噩梦。
我往昔尤为爱较死理儿, 说明上讲需消化五分钟, 我便紧盯着秒表, 一毫秒都不敢多延。
结果呢？细胞是下来了，但都变成了“饺子馅”——死得透透的。
再后来, 有一位资深的前辈跟我讲, 你这人是不是脑筋不太灵光, 每个不同批次的小鼠, 还有每种各异组织的质地, 都是存在差别的, 你就按照说明书那样一味地固执坚持, 那纯粹是在为难你自己。
关键是要看状态，不是看时间。
当你尝试着继续进行消化, 直至组织块最终变得相当蓬松, 其边缘最初开始逐渐模糊, 且液体略微有些变浑浊之际, 那就得赶忙立刻停下, 千万不要去管时间究竟有没有到达既定的标准, 哪怕仅仅只是过去了三分钟而已, 只要组织块已然呈现出散开的状态, 那就必须停下来。
如果5分钟了还硬邦邦的，那就再等等。
畏惧犯错大可不必, 我头一回自行盲目调整时间之际, 也曾致使一批死亡。然而已然逝去便罢, 总归胜过每次都倔强地死抠说明书。
培养基和血清，别在省钱上动心思
我知道，试剂很贵。
但我想说，有些钱真的不能省。
小小的鼠原代细胞, 可不似细胞系那般皮实, 它们挑剔得厉害, 你若给其饮用自来水, 它便会死给你瞧。
在细胞培养这件事上, 那些价格低廉的进口血清我尝试过, 所谓的“平替”培养基我也尝试过, 然而得出的结果却是怎么个情况, 细胞生长状况欠佳, 传代根本进行不下去, 就连相关数据也糟糕得一塌糊涂。
后来更换成了某品牌专门用于培养细胞的培养基以及血清, 虽说价格较为昂贵, 然而培养出来的细胞状态能够通过肉眼明显看出是良好的。变得又圆润、又透亮, 贴附在容器壁上也很稳定。
你省下的那几百块钱，最后都会变成几千块钱的重复实验和更贵的抗体。
真的，别跟自己过不去。
传代时机，看感觉比看时间准
很多人喜欢机械地按72小时、48小时来传代。
但小鼠原代细胞的生长速度，真没那么规律。
有时候, 你瞅着它已然长满, 铺展得匀匀称称的, 然而一旦经过消化, 就全都飘起来了。为何会这样呢? 是由于它还没有贴结实。
当前我的习惯是, 在达到百分之八十融合度之际, 便着手准备传代工作, 切莫待到融合度达百分之百之时, 因为那时细胞已然相互挤压, 且开始老化。一旦你对其进行打扰, 它即刻就会死亡。
而且传代的时候，别用太强的胰酶。
我有过一回尝试, 采用了百分之零点二五的胰酶作为材料, 然而其结果是, 在进行消化操作少于一分钟之际, 细胞全部收缩成为一团, 此后再也未曾展开过。
后来一直用0.05%的，虽然慢一点，但至少不会一锅端。
污染，才是最隐蔽的杀手
你以为污染会很明显？变黄、长菌、起泡？
不一定。
好多时候, 污染呈隐性, 支原体污染, 你肉眼压根儿瞧不见, 然而细胞生长迟缓、状态欠佳, 做实验老是出现怪异结果。
我以前总觉得自己的操作没问题，从来不检测支原体。
有一回, 一批又一批的小鼠原代细胞分别陆续经历了三个批次, 结果在第四个日子里, 它们全都呈现出消极怠工的状态, 于此时, 我才忍心下定决心去进行了一回检测, 结果可不得了, 竟然是支原体呈阳性的状况。
从那以后，我养成了定期检测的习惯。
别觉得麻烦。一个支原体污染，能毁掉你一个月的工作。
现在的试剂盒也不贵，周期也短，真的值得做。
最后一件事，也是最重要的
别一个人闷头干。
去饲养小鼠原代细胞, 往根本上说这是一项手艺方面的活计。别人所具备的经验 , 就连那是他遭遇失败的经验 , 都能够对你有所帮助从而避免掉入坑中。
之前, 我因一个有关消化的问题, 卡了足足两周时间。之后, 在一个论坛之上, 看到了一个帖子, 帖子称“加少量的 DNA 酶能够减少细胞团块”。我怀着试着尝试的心态试了一回——真的产生了作用。
就那一个小技巧，救了我整整一批实验。
那么, 不要惧怕丢了颜面, 不要害怕去询问。倘若你不去询问, 那你永远都不会晓得他人曾踩过的那些坑之中, 究竟哪一处是你很快就要踏入的。
说了这么多，其实都是些琐碎的细节。
培育细胞这件事, 不存在振聋发聩、石破天惊的宏大道理, 只不过是一个个细微问题的逐步积累罢了。
你做对了九十九步，可能最后那一步没做好，就全白费了。
然而, 反过来看, 只要你每一步均尽可能地做正确了, 那么那批细胞便会好好地存活着, 协助你将实验做下去。
为养小鼠原代细胞的兄弟姐妹们加油鼓劲, 这条路并非易行之路, 然而一旦走过, 确实极具价值。
