不知道你有没有这种经历……
有种情况是, 连续熬了好几个通宵, 转染试剂更换了大概三四种, 质粒提取了足足八百遍, 然而最后查看荧光时, 却发现其呈现出稀稀疏疏的状态, 类似秃头上的虱子那般, 能瞧见, 却不容易实质性摸到, 实在是把人给气坏了。
彼时我便这般寻思, 哎, 究竟是我手部能力欠佳, 还是这细胞自始便与我作对。
之后, 跟隔壁实验室的师兄一块喝酒, 他讲了一句话, 把我给点醒了, 那句话是: 你为什么不直接去买现成的呀?
什么是基因过表达细胞库？
归结而言呢, 是将那一些你所期望的、携带着某个特定基因的细胞, 预先为你制作出来, 冷冻妥当, 放置于那里。当你需要使用的时候, 直接进行复苏, 接着扩增, 便着手去做。
就跟去超市买速冻水饺一样。
不用自己和面、剁馅、擀皮，撕开包装扔锅里就行。
这么一想，是不是舒服多了？
为什么你不能自己慢慢做？
说实话，自己做也不是不行。
但是你得想清楚几个问题：
时间, 你得耗费一个月, 吭哧吭哧捣鼓那一株稳定转染的细胞, 人家仅仅三天就获取到数据并着手撰写论文了。毕业季来临之际, 一个月所蕴含的意义, 还用得着我多作阐释吗。
气运, 基因出现过表达这种情况, 确实存在着类似玄学的成分。存在一些基因, 做起来比较容易, 然而有的基因, 简直就像是棘手的难题——无论如何都不进行表达, 又或者一旦开始表达, 所涉及的细胞就会死掉。你自行去进行尝试, 却根本不清楚究竟是方法方面存在问题, 还是基因本身的问题。但是那些专业的细胞库, 它们具备标准化的流程呀, 它们所经历过的挫折与困难, 比你所摄入的盐分数量还要多。
自己做出来的稳定性, 传几代或许就遗失了。而买现成的, 人家已事先测好了, 呈现出有证书, 有数据的状况, 传个十代二十代, 其表达量稳稳当当的。
现货到底有多重要？
不是所有需要都叫“急”，但科研人的急，是写在脸上的急。
像是你才投递了一篇文稿, 审稿之人要求你补充一项试验, 数据得在两周之内提交上去。你会如何去做? 从毫无基础开始构建过表达细胞株吗? 别打趣了, 仅仅筛选就得要一个月的时间。
于此时, 你开启某一网站, 开展搜索“基因过表达细胞库”之举, 发觉你所需求的那个细胞, 恰巧存有现货。
三天到手。
一周出数据。
两周交上去。
这叫什么？这叫救命。
选基因过表达细胞库，要看什么？
说实话，我一开始也踩过坑。
有种库目睹着蛮齐全, 然而购置回来, 一经检测, 其表达量居然比不上对照组。拨通电话去询问, 那边说话吞吞吐吐, 声称或许是运输方面的问题。再次补发一批, 情况依旧如此。这般辗转拖延, 两个月已然过去。
所以现在总结了几点，算是经验教训吧：
观察验证数据, 这当中, 必要存在有着WB或者是qPCR的验证图的情况, 而不是仅仅只是口头声称已经做过了。
瞧瞧这份库存深度, 有些细胞库表面上名字众多, 然而当点进去时, 相当一部分却呈现出“预订”状态, 这般的存在根本不能称作库, 而是如同画饼一般~
瞧售后这一块儿, 细胞复苏率不达标准, 不然就是出现污染情况了, 这个问能不能补, 再问补的次数是多少, 这些都必须得问得明明白白的。
查看一下背景情况, 究竟是HEK293T、HeLa、A549呢, 还是其他的什么, 因为不同的实验对于细胞背景的要求是不一样的, 所以千万别买回来之后才察觉不合适。
那些你可能没想过的场景
跟你说个真事。
我存在一位从事神经方向工作的友人, 他要于某一神经元细胞系之内, 使一个长度极长的基因予以过表达, 此基因全长为8kb , 他自行进行转染操作历经两个月时间, 其间不断变换载体, 然而均未成功 , 后来寻觅到一个现货库, 发觉他们早就针对这个开展过相关工作, 并且所采用的是慢病毒系统 , 其滴度格外高。
他拿到手后，两周就把数据做完了。
另有一个相关人员开展肿瘤免疫方面的工作, 其要求是在某一特定的人源细胞当中, 同时实现三个基因的过表达操作。此种依靠自我力量来完成的难度程度, 只要稍微思索一番, 就会头皮发紧脑袋变大。最终所获得成果为购买已备好的具有现行通用性的组合, 待其复苏之后, 三个基因的表达量呈现出良好的状态。
所以有时候不是你技术不行，是你没找对路子。
到底值不值这个钱？
我知道有人会说，买现成的多贵啊，自己做成本低。
账不能这么算。
一个月的时间里, 你去做, 人工成本这一项, 试剂耗材这一项, 细胞培养成本这一项, 加起来真的会少吗? 更不用说, 要是万一失败了, 重新再来一遍, 成本会翻倍。然而去买现货, 你仅仅是花了一笔钱, 所换来的结果却是确定性以及时间。
时间是什么？
是毕业证，是职称，是项目结题，是下一篇文章。
你说值不值。
最后说一句
写这么多，其实就是想告诉你——
做科研已经很苦了，别在基础工具上再折磨自己。
含有基因过表达的细胞库此物, 恰似实验室之中的冰箱、离心机那般, 其仅仅属于一种工具。而工具是否好用, 关键在于人有无选对。
下次再做实验前，不妨先搜一搜，看看有没有现货。
也许你卡了几个月的问题，就这么轻松解决了。
反正我是信了。
