说实话，我入行那会儿，最头疼的就是选试剂盒。
于实验室之中, 那些被称作“专用”的试剂盒, 常常随随便便就规定了模板, 给出了指定的引物, 又明确了退火温度, 仿佛你手中所握的那一管样本非得卑躬屈膝地去迎合它才行。只要稍有一点杂质存在其间, 又或者模板的浓度出现偏差不对劲, 那么扩增曲线就会毫不理会地出现极差表现, 直接摆开懒怠的姿态, 不再呈现出应有的良好态势了。
后来被逼急了，开始用通用型的。
通用型PCR试剂盒，它到底通用在哪？
说白了，就是“不挑食”。
你把引物给换了? 它居然是认的。你把模板给更换掉了? 它同样是认的。退火温度稍微偏那么一点儿? 它依然是能够认的。
就如同一位食堂的大厨, 你讲今天想去尝尝川菜, 他能够进行炒制；明天要是想吃口味清淡些的, 他同样能够去煮制。你无需每日去更换那做饭的灶台, 也不用提前三天给出通知。
为什么大家都在问“选哪种”？
我猜，很多人跟我当初一样，被“专用”两个字唬住了。
专用听起来就厉害啊，对吧？像那种“专家门诊”，挂号费都贵。
然而问题在于, 你抽取的样本并非每一回都那般“高贵”。有那么些时候乃是临时构建的反应体系, 还有那么些时候是因为手抖从而多添加了0.5微升的模板。
在这个时候, 专用试剂盒开始表现出异常状况啦: 它的扩增效率出现了下降的情况, 非特异性条带呈现出四处乱跑的态势, 而且重复性糟糕到了离谱的程度。
通用型反倒脾气好。你犯错，它兜底。
通用型最大的坑，是什么？
别急，我还没开始夸呢，就得先泼冷水。
具备通用性的试剂盒所存在的最为显著的问题便是，它实在是具备远超一般的处理能力。
这话听着像夸，但真不是。
基于太过通用的缘故, 有时会将你的非特异性扩增予以“包容”。原本唯有目的条带应当发亮, 然而它却把引物二聚体照料得相当不错, 致使泳道上额外出现一条发亮的条带, 你全然不清楚究竟应不应该相信。
因而, 要是选择通用型, 那就必须得去看它在“宽容度”以及“特异性”二者之间所存在的那种平衡。
某些厂家所生产的通用类型, 乃是以牺牲特异性的方式来换取宽容度, 这般类型适用于初步筛选、大规模批量检测, 并不追求达到极致精准的程度。而另外一些则是借助酶以及缓冲液的优化, 达成了“宽容状态下却不紊乱”的局面, 那种才算是具备真正的能力。
怎么判断一个通用型PCR试剂盒好不好？
我自己的土办法，就三个字：试、比、骂。
首先进行尝试, 不要去听从厂家所吹嘘的内容, 拿着自己最为刁钻的模板去跑一管, 要是连那个模板都能够扩出来, 那么其它的就无需担忧了。
接着比。把你实验室当中最常使用的两三款试剂盒放置在一块跑, 同样的模板, 同样的引物, 同样的程序。谁跑得平稳, 谁承受力强, 一下子就清楚了。
最后进行责骂, 并非责骂试剂盒, 而是责骂自己, 倘若依旧处于犹豫状态, 那就责骂直至清醒自己: 通用型并非是无所不能的, 然而没有它, 你连具备任何可能性的时机都不存在。
通用型PCR试剂盒，适合谁？
说实话，它最适合那种“啥都测”的实验室。
到底明天的样本会是怎样的一个存在, 要知道这是难以确切知晓的, 其中的情况有可能是血液成分的状态, 但也说不定是组织形式的呈现, 还有可能是环境拭子, 然而你却没办法为所有单独分开的样本都去配备上一个专门用来检测的专用试剂盒。
还有就是，新手实验室。
萌新最畏惧的是什么, 并非是没办法进行扩展, 而是在没办法扩展的时候不清楚缘由何在。通用类型起码能够协助你去除“试剂盒”这一可变因素, 使得你能够放心地去查找模板、引物亦或是仪器方面的问题。
最后说点真的
我写这么多，不是为了让你拍板说“就它了”。
应该这么讲, 这所谓的选择之物, 不存在绝对的正确不正确。那通用型与专用型, 恰似平底鞋子以及高跟鞋那般。你是绝无可能天天都穿着高跟鞋的, 同时也绝对没办法永远仅仅穿着平底鞋呀。
关键看你要走的路。
倘若你所行进的道路是具备稳定性、重复性、批量性、不挑剔属性的, 那么你着实能够郑重其事地去思索一番通用型PCR试剂盒。
至少，它不会在你最忙的时候，给你添乱。
这大概就是它最朴实的好处了。
