将实话说出来, 当我头一回接触荧光标记抗体之际, 在我的脑子里面仅存在着一个问题, 那便是: 这东西难道不恰恰就是一个能够发光的“狗皮膏药”吗?
后来才发现，我错了，错得离谱。
它压根就不是所谓的膏药，它属于细胞世界当中的GPS定位仪, 它是分子级别的小型探照灯, 它是那些无法看见且触摸不到的蛋白质、抗原们的“显形水”。
荧光标记抗体到底是什么东西？
你做过那种黑暗里找钥匙的实验吗？没有。
要是你曾经做过Western blot, 或者做过免疫荧光, 那你肯定经历过这样的情况——明明心里清楚目标蛋白就在这个地方, 然而你却偏偏没办法看到它。
荧光标记抗体就是来解决这个问题的。
直白地讲: 它属于一种抗体, 其上附着着一个能够发光的“小灯泡”。此灯泡便是荧光基团, 当你给予它一个特定波长的光后, 它会回馈给你一个更长波长的光, 亮到让你眼睛发直。
为啥非得用它？不用行不行？
行啊，当然行。
你能够采用平常的抗体, 接着再添加一个二抗, 随后再添加一个显色底物, 几经折腾两三个小时, 最终获取一张模糊不清的膜。然而要是你期望查看细胞里某一个蛋白的具体所在位置, 想要追踪它于细胞里的运动路径, 想要弄清楚它跟别的蛋白是不是共同协作干活——平常的抗体根本无法达成。
荧光标记抗体就不一样了。
若是你将其加进去, 那它便会自行去寻觅目标, 而后发光。于显微镜之下注视着那些星星点点的处于微观世界里的灯光秀里的绿色、红色、蓝色, 宛如望着一场微观世界里的灯光秀。
它到底怎么工作的？
有个问题, 是我曾向实验室的师兄询问过的, 当时他只是简单地丢给我这样一句话: “就如同钥匙与锁那般。”。
我当时想打人。
其后我个人思索领会到: 抗体属于钥匙, 抗原是锁具, 荧光基团是系于钥匙之上的那个发光吊坠。钥匙插入锁中, 吊坠便会发亮, 如此你便能晓得——哦, 这把锁处于此地。
然而存在一个关键要点, 荧光基团不可以太大, 要是过大的话就会对抗体去“开锁”造成影响。并且也不能太亮, 倘若太亮了就会将自身“烧死”, 而这被称作光漂白, 这可是所有从事荧光成像的人最为头疼的事情。
买荧光标记抗体，最怕踩什么坑？
说真的，踩坑踩多了，你自然就懂了。
第一个坑：选错荧光波长。
你实验室之中的显微镜存在哪几个通道, 你心里难道没有清晰的认知吗? 购买回来一个FITC标记的抗体, 然而结果却是你的显微镜仅仅只有一个红色通道——恭喜你, 此次购买毫无意义, 完全白费了。
第二个坑：荧光强度不行。
有些价格低廉的抗体, 你添加了数量众多的一堆, 然而在显微镜下进行观察时, 却跟没有添加的情况毫无差别, 那种感受, 恰似你将手机屏幕的亮度调节至最低限度去观看视频, 最终什么也观察不清楚。
第三个坑：特异性差。
这个才是最为要命的一个情况。存在这样一种状况, 抗体不仅仅是结合那样的你的目标蛋白, 且还结合了一堆杂乱无章、毫无头绪的东西。经由一段时间之后, 进而你看到呈现一片亮的景象, 根本没办法全然分清这里面哪一个才是真正的、原本所期望的。这其实就好像是你身处于人群当中去寻找你的朋友, 然而紧接着出现的结果却是所有的路人都跟你的朋友穿了一模一样的衣服, 你会不会感到崩溃、你崩溃不崩溃?
怎么挑一个靠谱的荧光标记抗体？
我个人的经验是，别贪便宜。
针对那些正经品牌所推出的荧光标记抗体而言, 人家是做过质量控制的, 是测试过特异性的, 是给出过推荐的稀释比例的。你依照着说明书去进行操作, 基本上八九不离十。
另外, 要多去看文献, 别人用了某种抗体做出了好的结果, 你就依照着去购买, 千万别自己盲目地尝试, 一旦试错了, 时间和样品都会付诸东流了。
还有一个细节：注意保存。
经荧光标记的抗体, 惧怕光线照射, 惧怕反复且频繁地进行冷冻与融化操作, 惧怕叠氮钠超出规定标准。你需将其放置于冰箱靠里的最深处位置, 每次在使用之前进行离心操作处理, 使用完毕后要立刻将其放置回原处——如此这般, 它便能够陪伴你很长的一段时日。
它真的能做那些“高大上”的实验吗？
能啊。
依据它的是流式细胞术, 凭借它的是免疫荧光, 依赖于它的是共聚焦成像, 借助于它的是活细胞成像。
试问, 你想要知晓特定的某个蛋白于细胞进行分裂之际究竟跑到了何处吗? 那么, 采用荧光标记抗体的方式, 从而实现实时追踪。
你想知晓两个蛋白是否存在相互作用, 采用添加不同色彩荧光标记的专一性抗体的方式, 查看它们是否产生部位上的“重叠”现象, 以此来判断。
问, 经特定药物处理过后, 目标蛋白的表达量是否发生了变化? 采用荧光标记抗体, 进而测量荧光强度。
讲得直白些, 现今细胞生物学领域所占一定份额的重要部分, 皆是凭借荧光标记抗体才得以支撑起来的。
但我还是想吐槽一句
这东西，真的好贵。
就那么一小管, 竟然要几百块钱, 这价钱够我去吃好几顿火锅。并且每一回使用的时候, 我都是小心翼翼的, 心里特别害怕会造成浪费。偶尔, 实验出现失败的情况了, 头一个反应并非去剖析原因, 而是满心心疼那些抗体。
但没办法，贵有贵的道理。
你去思考一下, 有那么一只抗体存在, 它需要去识别目标物, 它所要达成的是结合得足够牢固, 它还要带着荧光基团从而能够发光, 并且它得在细胞内部待着, 还不能被降解掉, 它所承担的工作量, 相较于你在实验室加班一整天的工作量, 还要更大一些。
值了。
最后说个冷知识
你可曾思索过, 因何荧光标记抗体所显示的颜色多数是绿色, 是红色, 是蓝色呢?
因为人眼对这三种颜色最敏感。
换作一个紫外光再者是远红外光, 就算其亮得如同灯泡一般, 你仅凭肉眼也是看不见的, 得借助相机去拍摄。所以那些进行“多色成像”的实验, 皆是在为你的眼睛做“翻译”你所看不见的光这件事。
细品，是不是挺浪漫的？
被荧光标记的抗体, 从本质上来说, 就是助力像我们这般肉眼平凡之人, 去探寻那些隐匿于细胞之中、潜藏在蛋白质结构之内的秘密。它并非是无所不能的, 然而要是没有它的话, 好多实验实实在在地会寸步难行。
当你下次瞧见显微镜之下那呈现出的一片明晃晃的绿色荧光之时, 可千万不要忘记去对那一只始终兢兢业业的抗体心怀感激之情。它或许仅仅只是一件工具而已, 然而它以认真态度投入工作的那般模样, 着实是颇能让人内心生出感动之感的。
