酶标抗体，听着高大上其实没那么玄
讲真, 我头一回听闻“酶标记抗体”这五个字时, 脑海当中浮现出来的, 是实验室之内的白大褂, 还有显微镜, 以及各式各样让人看不懂的试剂瓶。而后发觉, 这东西实际上就是给抗体安了个“小喇叭”, 也就是一个能够发出信号的酶。
打个比方, 你派遣一个人前往某个地方去寻找某个人, 然而这个人身材矮小, 毫不起眼, 你极其难以知晓他究竟有没有找到, 该如何是好呢? 给他的身上捆绑一个荧光棒, 或者安装一个蜂鸣器, 这样无论他走到哪里, 你都能够知晓。
酶标记抗体就是那个身上绑了“蜂鸣器”的探子。
为啥要把酶和抗体绑一起？
本身抗体极为厉害, 能够精准识别目标, 不管是病毒, 还是蛋白质, 又或是某种特定分子。然而问题在于, 当抗体完成了“识别”之后, 一定要让外面的人知晓“哦, 它找到啦”。
仅仅依靠抗体自身, 它于显微镜之下什么都无法被看出来, 恰似侦探寻觅到了线索可是没携带对讲机, 没办法将消息往回传递。
酶就是那个“对讲机”。
将酶连接在抗体之上, 抗体负责搜寻并定位目标, 酶负责于寻得目标之后制造出一个可被检测到的信号, 此信号通常是经由催化某种底物, 使其发生变色或者发光的现象。经由肉眼观察判定, “哦, 此处显露异常状况”。
听起来简单，做起来难在哪？
接酶这个动作，看着只是“连根线”，实际上是个精细活。
酶属于蛋白质, 抗体同样是蛋白质, 二者皆为大家闺秀般的存在, 你绝不能随意用胶水一粘便了事, 连接方式有误, 抗体便会失效, 即它无法识别目标, 或者酶不再发挥功效, 又或者两者均失去作用标点符号。
还有一点, 衔接之时需考量空间结构, 酶要挂在抗体上不妨碍的位置, 不可阻挡抗体去“认人”, 恰似你不得在侦探眼睛处贴个喇叭, 在其不能视物的情形下又怎能去寻人呢。
存在比例方面的问题, 对于一个抗体而言, 挂多少个酶才恰当呢, 挂的数量少了信号就会微弱, 挂的数量多了抗体则会变得笨重, 这有可能影响到识别的效率，这种情况就如同做饭时放盐一样, 是需要去尝试的。
哪些场景能用到这玩意儿？
太多了，真的。
最为典型的当属ELISA, 其全称为酶联免疫吸附试验。在进行该项检测之际, 酶标抗体乃是那个“最终传递信息者”。当它寻觅到目标以后, 一旦加入底物, 颜色即刻发生变化。颜色越深, 意味着目标数量越多。
再一个较为常见的是Western Blot, 其用于进行蛋白分析。在完成电泳以及转膜操作之后, 通过采用酶标抗体进行孵育, 随后添加底物进行曝光, 如此一来条带便会显现出来。要是没有酶标抗体, 那你根本无法知晓膜上的蛋白究竟是何物。
另外存在免疫组化, 在病理切片之上, 运用酶标抗体去对特定细胞或者蛋白予以标记, 能够直观地看到病变区域, 好多癌症诊断都是依靠这个。
说白了, 只要你想要弄明白某个事物究竟存不存在, 数量是多少, 酶标抗体都能够提供助力。
有没有替代方案？为啥不直接上荧光？
不少人于网络上进行“酶标记抗体”搜索之际, 内心实际上正开展着这样的比较: 此物与荧光标记抗体之间究竟存有什么样的差异呢?
区别主要在于检测方式和灵敏度。
荧光标记抗体所需的是专门的荧光显微镜, 或者成像设备, 酶标抗体仅需一个普通的酶标仪, 甚至肉眼就能观察, 在成本方面酶标抗体会更加友好。
另外, 酶具备放大信号的能力。一个酶分子能够催化成千上万个底物分子轉化为产物, 进而使信号得到大量放大。然而, 荧光标记的一个抗体仅能携带几个荧光分子, 以至于信号放大倍数受限。
所以如果要检测极低浓度的目标，酶标抗体往往更有优势。
荧光具备其优势, 能够进行多重标记, 可同时对多个目标加以观察, 然而在这一点上, 酶标抗体却显得力不从心了。
没有绝对的好坏，只有适不适合自己的实验。
选酶标抗体该注意什么？
瞅瞅你会采用怎样的检测体系, 平常常见的酶存在辣根过氧化物酶也就是 HRP, 以及碱性磷酸酶也就是 AP, HRP 具备价格低廉、灵敏度较高、底物可供选择范围较多的特点, 然而容易遭受内源性过氧化物的干扰, AP 呈现出稳定性较为不错、背景较低的特性, 不过底物相对要贵上一些。
瞧你所要检测的究竟是什么, 是在细胞之中, 还是在组织切片之上, 是针对液体样本, 还是针对固定样本呢不同场景可是对于酶标抗体的要求并非是相同状态。
查看抗体自身的质量, 有时所购回的酶标抗体, 酶的质量良好, 然而抗体却不行；又或者抗体质量不错但酶却失去活性了。尽量购买知名品牌的, 抑或是自己家里连接质量好的。
承接自行去做实际上并非困难之事, 存在现有的试剂盒, 依照步骤开展操作便可以。然而新手易于出现承接过量或者承接不足的状况, 必须进行几次练习。
日常保存也要讲究
酶标抗体怕热怕冻还怕反复冻融。
买回来之后最好分装，一次用一支，不要来回解冻。
保存温度一般是-20℃，有些特殊产品要-80℃，看说明书。
所使用的稀释液平常情况下含有BSA或者脱脂奶粉, 其目的在于让蛋白质不被降解, 千万别直接用PBS进行稀释, 否则那就是在找死。
最后说几句自己的体会
酶标抗体这个东西，用多了你会发现它很皮实，又很娇气。
皮实所指的是, 只要在保存过程方面得当, 它能够于冰箱之内放置一两年但仍旧可被使用。娇气所指的是, 一旦呈现污染情状或者出现失情况, 整个实验便成为白做的状态, 而且你还并不知晓错误究竟处在什么地方。
针对做实验的人而言, 最怕的便是这种被称作“暗病”的状况, 即所有方面看起来都毫无问题, 然而唯独结果却出现了偏差。在进行反复排查之后, 最终才发觉原来是酶标抗体出现了过期的情况, 或者是遭到了污染。
所以要养成这样的好习惯, 记录购买的日期, 记录分瓶装的次数, 记录每次进行稀释的倍数, 记录用完之后有没有进行回收。千万不要偷懒, 因为偷懒之后补的坑会更大。
此外, 不要盲目迷信进口产品。当下, 国产的部分酶标抗体制作得也还可以, 而且性价比比较高, 只要经过验证符合要求就能够采用。当实验室经费处于紧张状态之时, 国内品牌同样是一种不错的选择。
酶标抗体并非那种高深到让人难以捉摸透的事物, 它仅仅只是一个工具而已, 要将它运用得当, 别因为它而致使事情受到耽搁。在该进行妥善购置的时候不要节省, 在该认真做好保存工作的时候不要偷懒, 如此实验才能够顺顺当当、平平稳稳。
希望这篇文章能帮你理清思路，少走些弯路。
