人主动脉平滑肌细胞。
如此这般的一个词放置于实验室的冰箱标签之上, 或者书写在论文的方法范畴之内, 并没什么可称稀奇的。但是倘若你的确在培养皿中照料伺候过它们, 你便会晓得, 这东西根本绝非是“养细胞”那般简易。它是具有生命的, 会耍闹脾气, 会呈现出死亡的状态给你瞧。
你是否也会感到诧异, 明明是相同的培养基, 相同的操作流程, 可有时细胞就能正常生长, 有时却突然大片浮动起来。我刚开展此项工作时, 气得都想对着显微镜恶语相向。而后才领悟到, 人主动脉平滑肌细胞之所以如此娇弱, 是由于它原本是从血管壁中提取出来的, 它所具备的那些功能——收缩、舒张、合成细胞外基质——都是在血管内作为“肌肉”发挥作用的, 你将它置于塑料皿中, 它根本不清楚自己该如何行动, 怎能不慌乱呢?
为什么它们动不动就死
不少人觉得平滑肌细胞易于培养, 缘由是其名字中有“平滑”二字, 听起来就显得温顺。这是错误的认知。其实它对血清的要求高得出奇。用国产血清感觉很顺手没错吧? 换一种血清试试, 三天之后细胞形态全然改变, 从梭形变为如同铺路石那般扁平，这就表明它开始转分化了。你不要不信, 我亲眼目睹过一个师兄的课题, 仅是因为更换了血清批次, 整整三个月的实验数据完全作废了。
还有用于消化的时间存在, 将胰酶多放置十秒之后, 可以发现细胞膜就破裂了, 要是少量放置几秒的话, 细胞就无法通过吹打而脱落下来, 你如果说这不是玄之又玄的学说又能是什么呢, 然而恰恰就是这种所谓的“玄学”情况, 决定了你在接下来一周的实验是否能够顺利开展下去。
传代几代才算安全
要是针对这个问题去询问同行, 十个人当中会有九个告知于你, 其话语为: 建议采用早代, 那早代达到何种程度呢? 是从P3到P5, 倘若再多的话那就不甚明晰了。然而你手头所开展的实验, 有时而言需要数量众多的细胞, 你是绝对无法始终进行扩增且不进行换代操作的。故而有人选择冒险行事, 硬是将细胞养至P8阶段还拿来开展Western blot实验, 最终条带呈现出极为混乱的状态, 空泛地声称这是“表型变化”, 实际上众人心里都清楚, 那就是细胞已然老化了。
客观来讲, 你与其费神去纠结究竟能够传承多少代, 倒不如更多地去 pondered 怎样把控每一次实验开始时的状态保持统一。切莫在今日从液氮之中取出一支, 而在明日又去取另外一支, 由于批次存在差异, 理所当然实验结果就会是截然不同的两种情形。
冻存和复苏真的要命吗
我有过目睹堪称最为离谱之事的经历, 那便是存在旁人将冻存管从液氮之中取出后, 径直扔入了处于37度的水浴里面, 最终致使管子出现破裂的状况, 而所有细胞就此全都浸泡在了水里。你讲此种情形若不称作失误, 难道要认为这是所谓“让细胞提前去经历投胎”的行为吗。
这事冻存其实没那么玄乎, 记住慢冻快融这四个字就行, 然而很多人却在“快融”这儿栽了跟头, 你觉得快, 实际上还不够快, 细胞在解冻期间, 冰晶会再度形成, 你动作稍微慢一点儿, 冰晶就会把细胞膜给刺穿, 说白了, 这并非是技术方面的问题, 而是手速方面的问题。
你实验室的培养基真的对吗
不少才开始接触这方面的人会有种想法, 觉得培养基, 只要配方大致相同就能拿来用。然而平滑肌细胞并不是那种随处可见大量供应毫不稀奇不值钱的物品, 它对于生长因子的需求是相当敏感的。要是缺少了PDGF或是TGF-β的信号, 它就不会行动, 甚至还会开始自我吞噬。而你所使用的那一瓶基础培养基, 里面是不是有这些因子, 你自己心里难道不清楚吗?
更为麻烦的是, 存在一些人, 其目的在于省钱, 于是自己去配制培养基。好家伙, pH值调得不准确, 渗透压连测量都不进行, 就径直往里面添加血清。结果细胞没有生长, 却骂细胞不行。你说究竟是谁不行呢?
实验数据不稳定是细胞的问题还是你的问题
这里说句不好听的，多数时候，是你自己的问题。
你的操作是否具备标准化, 每次进行换液的时候时间是否是固定的, 培养箱的CO₂浓度有没有去校准, 你在穿白大褂进入之前, 有没有让手进行消毒? 这些细节其中要是有哪个遗漏了, 细胞就会给你点颜色瞧瞧。而平滑肌细胞所给予的颜色, 便是你那条始终重复不出来的Western blot条带。
表面看着粗犷，实则心里门儿清
人主动脉平滑肌细胞, 不像神经元那般娇贵, 也不像干细胞那样难以处理。然而, 它具备一种极具“人类”特性的现象, 即: 你倘若越抱着不重视它的态度, 它便越会使你感到不适。反之, 你要是真正用心去对待它, 给予其稳定的环境条件, 提供恰当适宜的营养物质, 并且进行温和细致的传代操作, 那么它就会顺从地依照你的期望生长。
说到底，科研里哪有什么“简单”的细胞。
每一个细胞的背后, 都有着你于实验室之中熬过的那些夜晚, 都有着你更换过的培养基, 都有着你反复去进行优化的条件。平滑肌细胞仅仅只是一块试金石罢了, 它所测试的并非是你到底有多么聪明, 而是你有没有那份耐心去理解它。
下一回, 当你注视着显微镜之下那些呈现梭形的微小物体时, 不要急急忙忙地发出抱怨, 它们已然竭尽自身所能, 你同样也是如此这般。
