话说实在的, 写了这诸多年份的培养基, 我实际上是颇为惧怕同人交流阐述“完全培养基”此一概念的。
不是因为它复杂。
是担心我一旦张嘴说话, 就会致使所说的内容太过“科学”, 进而导致你在听完之后依旧处于完全摸不着头脑的状态、一头雾水, 随后返回了这样的回应: 哦, 那不就是带有血清的培养基吗?
好多人直至如今都认为, 处于完备状态的培养基即意味着基础培养基与血清以及双抗相加, 分三步达成, 便完成了。
我不能说你错。
然而要是你所饲养的是那些娇弱易养不好的细胞, 好比原代细胞, 又或者是干细胞, 甚至是某些肿瘤细胞株, 采用这样的方式去处理, 细胞怎么可能会对你呈现出友善的态度, 那是绝对不可能的。
为什么你的细胞总是一副“想死”的表情？
先别急着换血清。也别急着加生长因子。
你有没有想过，问题可能出在最开始的那个“基础培养基”上？
比如说, 你所饲养的是 MSC , 然而有人却直接采用DMEM , 它依然能够存活 , 可是状态又如何呢? 其形态发生了变化 , 分化能力也不稳定 , 而你却还认为这是自身操作手法方面的问题。
很多情况下, 并非是属于你的锅, 而是培养基的配方之中缺少了细胞切实需要的事物。
钙离子的浓度, 氨基酸的配比, 缓冲的体系, 这些书写在瓶身上的小字, 从来都不是随意去书写的。
什么是真正的“细胞完全培养基”？
我自己的理解是：它不是“加”出来的，而是“调”出来的。
称得上“完全”的培养基, 应如同量身定制的西装, 并非最大号, 而是最合身的那种, 是真正的完全培养基所处的状态, 如同量身定制的西装, 不是最大号, 而是最合身。
它需考量你这个细胞个体的特性, 增殖速度是否快速, 贴壁程度是否牢固, 代谢废物的能力是否极为薄弱。
然后去定制那个配比。
例如, 存在一些细胞, 它们对谷氨酰胺有着特别的依赖, 然而要是你一股脑地添加了标准浓度, 那么可能在中期的时候就会开始积累氨, 也就是细胞自身所产生的废物, 最终把自身给毒死了。
你都不知道。
这就是为何当下越来越多的商业化满满成分全而综合的培养基, 会去选更稳固稳定的替换替代物, 像丙氨酰毗连连接着谷氨酰胺二肽这样类别的。
你大概会问：那我怎么挑？
说实话，这个问题最难回答。
由于各个不同的实验室, 其情形存在差异, 各个不同的课题, 预算有所不同, 并且每个人, 对于“细胞状态良好”的界定, 也是不一样的。
有人认为长得疾速才佳, 有人觉得形态适宜则行, 有人必定会去做流式, 其要求高得匪夷所思。
我只能说，先搞清楚你的“刚需”是什么。
假如仅仅是进行养个常规细胞株传代来做实验这种行为, 那么大部分在市面上所售卖的完全培养基都是能够满足需求的, 去购买培养基时获取其配套的完整配方即可, 不要自己毫无头绪地随意折腾。
但要是你所从事的是需发表具有高分数的文章的工作, 又或者是后续打算将其用于开展临床前研究的情况, 那么在此建议你还是选用经过专门定制的或者验证过的完全培养基。
别省那点钱。
其实，培养基这个东西，挺像养花
我想了很久，怎么把这个比喻说得更贴切一点。
基础培养基就像土。血清就像肥料。生长因子就像水。
你仅仅只有土, 即便种子能够存活, 然而却长不佳。你给予的水肥过量, 那根就会腐烂。你把所有都给予了, 可是土不合适, 依旧是徒劳无功。
什么是完全培养基呢, 就是有其他人替你调配好了“这盆花”所需的全部东西, 诸如什么样的士壤, 什么样的肥料, 间隔多久进行一次浇水, 这些所有的因素全都被调整到了最为理想的状态。
你要做的，只是把它倒进去。
听起来很爽对吧？
但问题来了：到底哪家公司的完全培养基靠谱？
我不点名。但可以说几个判断标准。
针对你这株细胞, 有没有做过验证, 不是那种随随便便拿个所谓“通用型”就可以的, 这是不行的。
这周所买培养基培育出的细胞, 与下周所买培养基培育出的细胞, 二者形态是否存在显著差异呢。倘若二者呈现出两种不同形态, 那么在很大程度上就很有可能需要更换培养基的品牌了。
技术支撑这方面到底是不是真的明白呢, 有时当你拨打那个电话去询问某个问题时, 电话那头却吞吞吐吐地讲出“我帮您好好去查找一番”这样的话语, 此时你心里便自然会意识到, 情况不妙了。
老实说，我见过太多被培养基坑的案例了
有个从事神经科学方面研究的朋友, 养了长达大半年时间的原代神经元, 却始终觉得自身所养的细胞状态欠佳, 原本认为是自身操作过程存有问题, 于是更换了数量多得数不清的种种辅剂。
后来我让他换个品牌的完全培养基试试。
换了之后，他说：原来不是我菜。
我当时笑死了。
只不过是他出现的那种感慨, 实际上我是格外理解的。为何会这样呢? 是由于在实验室当中, 存在着许多反复出现的失败情况。而这众多反复出现的失败, 其根源常常在于那些你压根从未置疑过的基础物料。
它太底层了。太基础了。太容易被忽视了。
所以, 你在今天, 愿意点入进来, 去搜索“细胞完全培养基”, 我认为, 你起码已经察觉到, 这件事情, 也许比我所想象出来的更为重要。
那就对了。
最后说几句没用但想说的话
其实我写这篇的时候，一直在犹豫。
这是由于我清楚, 可供选择的完全培养基价钱并非低廉, 特别是那些进口的。存在部分实验室, 其预算受到限制, 仅仅能够购买基础培养基加以自行配制。
我懂。
然而要是你具备相应条件, 我依旧提议你去尝试一下品质更优良的完全培养基。并非是出于想炫耀财富的目的, 而是为了使得你的时间以及精力, 不会被耗费在那般原本能够避免的失败之上。
细胞是你实验的起点。
这个起点稳了，后面才会顺。
不然呢, 你后续哪怕开展了再多堪称精妙的实验设计, 然而培育出来的细胞状况不佳, 致使所有数据都沦为毫无价值的废物。
那才叫真的亏。
