我在这就说一句大实话。
从事PCR操作时, 最怕的是什么呢? 并非是跑不出条带这种情况, 而是时间这个因素。
你有没有等待过那个机器, 等待的时长是一个小时, 又或者是两个小时, 就这样眼睁睁地看着进度条一点一点地朝着前方缓慢爬行, 与此同时手里其他的事情完全没有办法去做, 下午四点要进行取样操作, 原本心里想着在八点之前能够顺利完成然后回家吃饭, 然而最终却是非常强硬地被拖延到了晚上十点。
那种感觉，谁懂啊。
市场上那些号称“快速”的, 好多实际仅是换了个标签而已 , 即便说其快, 或许也就快了十分钟 , 然而当你详细询问时 , 样本量少可不可以 , 模板浓度低行不行 , 它就又不吭声了。
快速，到底要快到什么程度？
这其实才是大家真正关心的问题。
不是所有的实验室都能够配备得起那种价值几万块大洋的全自动大型设备。大多数人, 特别是我们这些有如普通科研犬一般的存在、检测人员、在生物公司从事项目工作的人员, 手中所拥有的仪器仅仅是最为普通的PCR仪而已。我们所追求的“快”, 是建立在现有的设备根基之上, 不进行机器的更换、不改变程序设定、直接实现速度的提升。
半小时之内搞定一轮扩增，这个算快吗？
有人觉得不可思议，但我告诉你，现在已经有人做到了。
不是越贵越好，是越“省”越好
聊到这儿，我想岔开一句。
你可曾发觉, 好多试剂盒的设计想法是违背人之常理的? 它致使你添加这个又添加那个, 每一环节都谨小慎微地计算容积, 唯恐添加过多或者过少。而后说明书里还记述着“提议运用进口枪头”、“提议运用无核酸酶水”……仿若我们这群人的实验室环境糟糕透顶似的。
其实不是条件差，是没那么多预算。
真正称得上好的、能够做到快速PCR扩增的试剂盒, 理应具备坚固紧实耐用的特性。哪怕你在操作过程中不小心多添加了0.5微升的模板样本，它也不会出现任何问题。就算你所使用的水并非达到超高纯度标准的, 它依旧不会受到影响。即便你将退火温度设置得略微偏离了正常范围一两度, 它依旧能够成功出现条带。
省时间、省钱、省心——三样都占了，才是好产品。
有个事我想吐槽一下
市场上存在的试剂盒, 宣称是快速版本, 然而你需要将退火时间压缩至10秒, 还要把延伸时间也压缩至10秒, 可是仪器升温速度根本跟不上, 即便设置了也如同没设置一样, 完全没有作用, 等于白做了。
这不是你的问题，是试剂盒没有适配真实场景。
本就聪慧至极的那种设计, 理应是将条件予以放宽: 也就是你完全无需去更改任何一项参数, 直接运用原本的程序, 它自身便能够比寻常的速度快上一倍。如此这般才堪称是“快速”, 而绝非是强制着你去进行极限操作。
那么到底怎么选？
我觉得啊，你也不用看那些花里胡哨的宣传语，就看三点：
它所呈现出的“快”, 难道是构筑于对灵敏度进行牺牲的基础之上的吗? 众多具备快速特性的试剂盒, 一旦模板浓度处于较低水平, 便会出现表现欠佳的状况。你若要开展一项针对环境样本的操作, 其中的DNA原本数量就稀少, 然而最终它却无法为你实现扩增。如此一来, 那它所谓的快又能有什么实际效用呢? 只是白白地忙活一场罢了。
它的稳定性能持何种状态, 不同的批次以及不同的操作人员, 所产生的结果是否能够保持一致, 进行实验这般事物最惧怕的便是无法重复得出, 一次呈现良好态势, 两次呈现欠佳态势, 致使你根本无从知晓应当相信其中的哪一个结果。
它在适配你手头机器这件事上, 究竟是不是真的可以做到。部分试剂盒会宣称具有快速的特点, 然而却仅仅能够在特定型号的仪器上面才能有效果呈现出来。在你存放于实验室当中的老旧机器方面, 它是否能够识别。
这些问题，比什么都重要。
其实我最近试了一个
且不吹嘘且不抹黑, 早些时候我持续使用的乃是某大型工厂所生产的常规试剂盒, 进行一轮操作大概需要一个半小时。之后经由同事予以推荐从而更换了一款国产的具备快速特点的 PCR 扩增试剂盒, 它叫什么来着——就不再提及那个具体名称了, 目的是防止涉及广告宣传。
它的包装之上写着“30分钟完成扩增” , 就在那时我的心里想着, 吹吧你就, 而后首次进行尝试, 设置了32个循环, 退火时间以及延伸时间俱都未曾更改, 直接套用原本的程序。
28分钟跑完。
当时, 我一下子愣住了，心里觉得机器是不是坏啦。随后, 重复了三次, 每一次呈现出来的都是稳定状态的亮带。就连我那位从事PCR工作长达十年之久的师姐, 都特意跑过来瞧了一眼，还说道“哎, 这个表现挺不错的呀”。
当然了, 她随后又补充说了一句, “你该不会是用我上次提及的那管高浓度的DNA去进行检测的吧? ”。
我不禁笑了, 表示怎么会有这种可能呢。我特意选取了一个浓度较低的, 另外还有一管存在些许降解情况的, 逐一都进行了一遍完整操作。最终所有的都显露出来了, 带型呈现得极为干净利落。
说到底，还是信任
做实验这件事，说到底是个信任问题。
你相信这个试剂盒不会对你造成损害, 你相信它每一回都可以出现相同的结果, 你相信它不会在你最为急需数据的时刻出现问题。
专门用于快速PCR扩增的试剂盒, 简单来讲就是能够助力你节省时间。然而省下来的这些时间有没有可能切实真正用于去做其他事情, 那得看你对它是不是持有相信的态度了。
倘若你每一回都得在其旁边注视着它跑完方可安心, 那么这个“快”便已然丧失了意义。
然而, 就我的私见而言——去寻觅那种诸如存在真实事例、有同行已然使用过的情形, 切不可仅仅着眼于参数。于实验室范畴内, 口碑这般事物, 较任何宣传而言, 更具可信度。
最后再多说一句
当然也不是说贵的就一定好，便宜的就不能用。
我感觉, 于这个领域而言, 国产存有挺大进步。以往我们老是迷信进口, 认为人家的物品可靠。然而当下, 很多国产试剂盒在“快速”这一赛道上, 有了不一样的表现。
你不妨试试。
总归而言, 试上一盒并不会有什么损失。倘若真的节省了时间, 那么在接下来几年所开展的实验当中, 全程你都能够更早一些回家吃上饭了。
你说是不是。
