我懂。那种感觉。
你注视着那个PCR仪, 屏幕上的倒计时仿若某种如今的酷刑。隔壁实验室的同事已然得出结果了, 而你仍在等待。试剂盒上 written 着“快速”, 然而你心里明白, 那仅仅是包装上的一个词语。你尝试过调高退火温度, 尝试过减少循环数, 尝试过更换不同的聚合酶, 可结果要么是对照出现了问题, 要么是条带模糊得如同雾里看花般。
真的很烦。
实际上, 你所需求的并非是价格更为高昂的仪器, 也并非是程序更为繁杂的那种。你所需要的, 乃是一个切实能够运作起来的试剂盒。并非是那种将时间从两小时压缩至一小时五十分钟这般虚假的快速, 而是实实在在减少一半时间那样的。
我上周用了一个新东西。
怎么去表述, 当处在首次进行上机操作的时刻, 我竟然对自身是否将程序设置错误产生了怀疑。二十 五分钟? 这简直如同在开玩笑一般。然而当相应结果呈现出来之际, 彼时那个目标条带明亮得令人眼睛刺痛, 相较于先前运行一个半小时所得到的结果还要更为纯净。我反反复复进行了三次确认, 随后又选用不同的模板再次尝试了一回 —— 得到的情况皆是一样的。那种感受, 该如何做说明, 恰似你长久以来一直认定从自己的住所前往工作的场所必定会遭遇堵车长达一小时, 突然有一日发觉存在一条便捷的路径仅仅只需二十分钟便可抵达。
快速扩增到底有多快？
什么才算真正的“快速”？
街市之中标称“快速”的试剂盒简直超多。存在一些能将延伸时间经30秒压缩至15秒的, 然而你得自行去调试程序, 自行去试验条件, 自行去默默祈祷它别出现差错。而实际上的快速, 是只要你随意设定一个标准程序, 它便能够自行快速运行。恰似你电脑上的“快速开机”, 并非要你手动去关闭后台进程, 而是只需按一下电源, 它自身便苏醒过来了。
我所测试的那一款, 从发生变性直至进行延伸, 每一个循环仅仅使用了正常程序所需时间的极少部分。具体的数字我不想依照说明书去念了, 不过能够告诉你: 你去泡一杯咖啡再回来, 它已然完成运行了。
有没有副作用？比如特异性下降？
看到这儿你必然会思索: 进度加快了是不是就不精准了呢? 恰似速溶咖啡与手冲咖啡之间的差异那般。
我也这么想过。
可是实际运用之后, 最令我感到意外的便是这样一点。它所具备的特异性好到超乎常理。以往使用普通的试剂盒时, 有时会出现非特异条带冒出来的情况, 特别是那种 GC 含量高的模板, 简直就像是故意跟人对着干一般。然而这个快速试剂盒, 却反倒把那些杂带压制了下去。我就此事询问了技术支撑人员, 他讲是酶的结构进行了优化, 使得对错配的容忍度降低了。
反正我不懂那些分子细节。但我懂结果。干净，真干净。
它的核心到底是什么？
是酶？还是缓冲液？
我曾拆解过几个隶属于不同品牌的试剂盒包装盒, 当然啦, 那是在垃圾桶里偷偷捡起来查看的。你能够发现, 存在一些厂家, 他们倾向于在缓冲液里面增添各类“黑科技”, 还有一些厂家, 他们则是更换了酶。然而这款试剂盒有所不同, 它在这两方面都做出了改变。其中的酶是全新的工程化聚合酶, 据说这种酶在体内的结合速度提升了三倍。在缓冲液里面添加了一种特殊的增强剂, 并非那种价格低廉的甜菜碱或者DMSO, 而是一种能够使模板更易于解链的物质。
一大堆内容被书写在了技术文档中, 致使我阅读时感到头疼。然而, 你仅需明晰一件事情, 那便是它对传统PCR的时间窗口进行了重新定义。以往的时候, 你需要逐个步骤去进行优化, 而如今你仅仅需要添加样本、将其放置到仪器上、然后离开即可。
这些优化可靠吗？
当下, 我多说已无益处。然而，我得告知你一个细节: 我运用它去跑了数量超过两百个的样本, 其中存在血液提取的样本, 存在组织切片的样本, 存在石蜡包埋的样本, 甚至存在那种放置了三年、浓度低至几近测不出来的样本。最终, 没有一个出现失败的情况。这相较于我所使用过的任何一款试剂盒而言, 都要更为稳定。
那些你不说但是会担心的事
价格会不会很贵？
这难道不是你最为关注的问题所在事项吗, 毕竟实验室所具备的经费数量是有限的, 一旦购置了一款价格昂贵的物品, 那么其他方面的使用就要秉持节省的原则来进行。
然而, 我进行了一番计算: 往昔跑一次PCR需耗时两小时, 如今仅需二十五分钟。这表明你一日能够开展三批甚至四批实验, 而不再是两批。要是你手头存有大量样本, 效率便实现翻倍, 因时间成本而节省下来的资金, 远远多于试剂盒本身贵出的那微小部分。况且，它并未贵很多。我所使用过的几款快速试剂盒当中, 它属于性价比处于最高水平的那个梯队。
操作上有变化吗？
没有。真的没有。
往样本里添加的量是相同的, 用于引导合成的引物其浓度是一样的, 作为复制起点的模板数量是一样的, 就连使引物片段与模板结合的退火温度都直接采用常规的那一套标准。你并不需要针对任何条件进行再次优化。这一情况是极为重要的——你是清楚的, 存在一些被称作“快速”的试剂盒, 它们会要求你去重新设计引物, 还要重新调整程序。要是这样做的话, 所谓“快速”的意义就会被极大地削弱了。
这款不需要。直接换过来就行。
实验的另一种可能性
实在讲, 写到这个地方, 我略微有些拿不准到底应不应该持续夸赞它。鉴于我感觉, 它所处理解决掉的并非仅仅只是“快”这一方面的问题。
它还解决了“不操心”的问题。
你可晓得那是何种感觉? 那是当你完成一批PCR的操作之后, 需得等到次日方可查看结果, 结果致使一整晚都难以安稳入眠, 老是忧虑是不是样本加错了, 还是电泳跑飞了。如今情况不一样, 在下午四点开启电泳, 到四点二十五分便得出结果, 要是有问题还能够在当天补上一批。从容, 的确是从容的。
前三日我运用其去进行了一回特急样本的实验操作, 午后三点之际老板宣称“明日清晨需得出成果”, 我于午后四点起始着手, 五点便已然获取了胶图的呈现。当老板目睹那结果之时, 其神情极为繁复。我明晰他内心所思索何为: 这个事物是否具备可靠性啊? 不过当我将再三重复达成的结果置于他跟前时, 他未作任何言语表述, 仅仅是点头示意了两下。
那种感觉真好。
写在最后
其实撰写这篇文章之际, 我曾徘徊不定。鉴于实验室范围就这般大小, 我晓得优质之物, 倘若分享出去, 众人皆去使用, 我的“优势”便不复存在了。然而转念思索, 要是你也曾遭受那些迟缓的PCR的折腾, 要是你也曾因效率欠佳而被导师斥责过, 要是你也曾因样本过多而无法排上机器使用进而熬夜过——那么我认为, 你应当清楚有这么一样东西。
你用不着去更换仪器, 用不着去改动程序, 用不着去再次进行优化, 仅仅只需将试剂盒更换一下, 如此就可以了。
就这么简单。
一个并非具有颠覆性特质的黑科技的快速PCR扩增试剂盒, 它仅仅是将那些按道理原本就应当如此的事情, 给做正确了每个句子最后都有标点符号。
