确实是以实情相告, 在起始的时候, 当目睹“WT97人常染色体多囊肾病上皮细胞”这般冗长的名称, 我同样发觉脑袋发蒙, 心里犯难, 感觉麻烦, 觉得困扰。
但是从事搞研究工作的人都明白, 这个东西, 实际上就是当我们去做关于多囊肾病机制实验的时候, 放置在桌上的那个小小的培养瓶里面所培育着的那群珍贵的细胞。
它们并非平常的肾上皮细胞, 它们携带着常染色体显性多囊肾病的基因突变, 确切来讲, 乃是疾病模型的“活体样本”。倘若你从事这方面的课题研究, 或者刚踏入此行业欲寻找一份靠谱的细胞模型, 那么你算是找对地方了。
为什么偏偏是WT97，而不是别的？
实验室里头, 细胞系数量众多, 为何从事ADPKD研究的人员, 全都将目光聚焦在WT97之上呢?
我猜你们肯定搜过“多囊肾病细胞模型怎么选”这种问题。
打个比方, 要是你打算专注研究一辆频繁出现爆胎状况的车, 那你必然得寻觅一辆曾经爆过胎的车来进行拆解, 而非随意挑选一辆崭新的车去查看。WT97就是那辆有着爆胎经历的车, 它源自一位患有ADPKD疾病患者的肾脏上皮部位, 天然地携带着那个致使囊肿产生的突变基因。
一大批才开始涉足此领域的人会发出这样的疑问: “借助该细胞能够模拟出与实际的囊肿别无二致的东西吗? ”。
能够做到, 并且相较于那些经过基因编辑改造的细胞而言, 更加贴近于真实状况。它不存在需要你去敲除何种基因的情况, 它自身便是疾病的一种缩影。你于它身上察觉到的生长情形、增殖现象以及囊泡形成状况, 就是患者体内正在实际发生的那些事情。
养这个细胞，最怕什么？
我懂，搞细胞实验的都知道，养细胞最怕它“不听话”。
你可曾碰到过这般状况呀? 细胞被买回来之后, 传了两代, 突然间不再生长了, 或者其形态发生了改变, 原本圆滚滚的模样变成了扁塌塌的样子。
名为WT97的这个细胞存在一个特点使得它比普通肾上皮细胞更为“娇气”对于此细胞而言它对培养条件的变化表现得尤为敏感无论是血清批次发生了更换还是培养基的PH值出现了稍微的偏差它极有可能会出现“闹脾气”的状况。
有人问我：“WT97细胞容易污染吗？”
实话讲, 不存在哪一种细胞能够躲避污染的风险。然而WT97鉴于生长速度并非特别快, 要是混入些许成纤维细胞或者杂细胞, 它极易被压制。所以, 操作之际的手速、超净台的风速、培养箱的湿度, 统统都得密切留意。
实验做到一半，细胞不长了，怎么办？
“WT97细胞传代后多久能稳定增殖？”
普通情况下是要给予其四十八至七十二小时的适应期间的。不要心急, 不要在刚刚铺完板的次日就匆忙进行加药处理。给予它一些时间, 让它先能够处于舒适的状态。
我所见识到的最为糟糕的情形是, 有人将细胞从液氮之中取出进行复苏, 到了第二天查看时细胞全都贴壁了, 到第三天便径直采用高浓度药物予以处理, 最终细胞全部死亡了。他居然还认为是细胞自身存在问题, 实际上是他太过急切了。
WT97细胞在从进行消化直至完成传代这个过程中, 对于胰酶作用的时间必须要精准把控好。各个不同实验室所使用的胰酶其活性存在差异, 然而通常来讲也就仅仅一两分钟的时间, 一旦观察看到细胞的边缘部位开始呈现出变亮以及变圆的现象, 此时就需要马上果断终止胰酶的作用。
这个细胞能用来做什么实验？
谈到这个地步, 大概相当多的人最为关注的便是：“WT97细胞可不可以开展囊泡形成实验呢? ”。
能，而且这是它最拿手的。
若是你将细胞种至基质胶之上, 或者处于低血清条件下予以培养, 待过几日, 便可看到透明的、类似小水泡那般呈现的东西从堆积放置的细胞里面冒出来。这即为外界条件下模拟肾脏囊肿进行形成的整个过程。要是你妄图筛选药物、查看某一个基因对于囊泡进行形成所产生的影响, 此模型是最为合适恰当的。
居然还有人提出这样的问题: “能够运用它去开展信号通路方面的研究工作吗? ”。
诚然, cAMP、mTOR、EGFR这般通路, 于WT97里头基本上均是异常被激活的状态。你采用抑制剂去处理一番, 瞧瞧下游蛋白的改变情况, 把数据一做出来, 文章里头那般几张Western blot图便会有了。
买回来之后怎么保存？
这个比较简单。
你在拿到细胞之后, 先去进行几代的扩增，将那些状态处于最佳的挑选出来予以冻存。用于冻存的液体采用含有百分之十DMSO的完全培养基便可以了。不要存有过多的贪心, 每一管去冻存一百万到两百万个细胞就足够了。在进行冻存这个操作的时候, 要采取梯度式降温, 不要直接就放置到零下八十度。
“复苏后多久能用于正式实验？”
稳定传代至少得两代才行。将第一代复苏出来, 它或许还在“回想”自身究竟是谁, 待到它开始第二代稳定增殖的时候, 这才是你着手操作的恰当契机。
最后说点大实话
WT97这个细胞，不是完美的。
多次传代后, 它的基因表达同样会出现漂移。 故而别去期望养到二三十代彼时状态还如刚买回来那般。 通常来讲, 使用10代以内最为放心。
并且它针对药物处置的反响, 跟你所设想的“指数级降低”大概并非完全相同。有时你会察觉到十分显著的剂量依靠, 有时它半死不活地顽强抵抗着, 就是不死去。这正是实际的疾病模型, 并非教科书里的理想曲线。
所以, 不要惧怕数据呈现出的状况不尽如人意。不管怎样，只要是你全情投入细心去做的, 即便最终得出的结果与预先设想的情形背道而驰, 那同样属于科学范畴。
起草这篇文章, 并非是讲这个细胞具备多么传奇的特性。只是期望从事这个研究方向的友人明白, 你所培育和照料的那个对象, 既没有那般高深莫测, 可其实也并非如此轻而易举所能掌握的。
该换液就换液，该传代就传代，别偷懒，也别慌。
