植物样本那么特殊，普通试剂盒真能行？
说实在的, 开展植物研究的人, 哪有没被ELISA坑过几回的? 样本提取出来颜色出现偏差, 背景高到离谱的程度, 标准曲线根本绘制不出来……随后便开始对自身产生怀疑: 是我操作方面存在问题? 还是这个物种本就不适宜用于做ELISA?
其实，很多时候问题就出在试剂盒上。
植物跟动物存在差异, 细胞壁、叶绿素、酚类化合物、多糖等这类繁杂的物质, 一旦进到反应体系里, 平常的ELISA试剂盒根本承受不了, 实际上, 那些并非针对植物设计的试剂盒, 你使用时就如同拿螺丝刀去撬钉子, 既费力又容易崩裂。
那怎么选？别只看品牌，看“适配性”
植物ELISA试剂盒到底看什么指标？
您去搜索“植物ELISA试剂盒” , 会跳出数量众多的相关内容 , 其中包含关于灵敏度的 , 关于检测范围的 , 关于种属反应的等等 , 看得人眼花缭乱。
但我跟你说，核心就两点：样本前处理兼容性和交叉反应率。
为什么会这样呢? 原因在于植物提取物当中存在着较多的杂质, 要是试剂盒的抗体对于这些杂质较为敏感的话, 那么最终的结果便是假阳性到处都是。你费尽心力进行了为期三天的实验, 最后在读取实验板的时候, 却发现所有的数据皆无法使用了。
别问我怎么知道的。
除此以外还有标准品, 部分试剂盒所使用的标准品为重组蛋白, 其与植物内源蛋白在结构方面存在较大差异, , 致使标曲拟合度欠佳, 计算得出的浓度偏差极为离谱, 因而, 查看一下该标准品的来源, , 是否与你所检测的目标保持一致。
样本类型那么多，一个试剂盒够用吗？
你对叶片、根、茎、果实, 甚至种子进行检测, 不同组织成分差异极大。譬如叶片中叶绿素的含量丰富, 果实里糖分的含量高, 种子内油脂的含量多。若有一个试剂盒要涵盖所有这些样本类型, 那么抗体设计就必须足够“扛造”。
品质优良的试剂盒会开展样本类型验证工作, 向你阐述什么样的组织能够直接进行检测, 什么样的组织需要进行稀释处理, 什么样的组织需要额外去除干扰物质。
倘若产品页面之中仅仅书写着“适用于植物样本呢”, 然而却并未具体地罗列出来究竟是哪些植物, 又是哪些组织呢……你自行去仔细品味一番。
操作时间太长，真的会崩溃
执行实验时最担忧的是什么呢? 是时间延续得过于漫长。特别是像 ELISA 这般存在多步孵育情况的, 只要其中一步拉长十分钟, 那整个实验就会额外多出一两个小时。并且植物样本具备的稳定性欠佳, 放置较长时间后目标蛋白会出现降解、氧化的状况, 最终导致结果变得越来越糟糕。
故而, 去寻觅那些总孵育时长较短的。诸如一步法、两步法的试剂盒, 相较传统三步法要快出许多。存在一些优质的植物ELISA试剂盒, 整个流程能够在两小时之内完成, 标准曲线稳定, 重复性也颇高。
别看轻这节约下来的时间, 这时间意味着, 你能够在相同的一天之中, 再多跑几块板, 或者能够准时下班。
价格低就一定划算？算一笔账
售价低廉的试剂盒, 极有可能连标准曲线都绘制得不理想, 从而造成样本的浪费, 导致时间的白白耗费, 使人情感上也备受挫折。最终却不得不再次购买, 再度进行操作, 结果发现, 反倒是价格最为昂贵的那个才好。
然而并非越昂贵便越好 , 关乎的要点在于查看其回收率以及精密度数据。 回收率处于90%至110%之间 , 且批内变异系数（CV%）小于10%的 , 大体较为可靠。 这些数据在产品说明书当中皆有呈现 , 切莫仅关注价格排名 , 往下翻阅技术参数。
你开展实验的目的在于获取数据, 并非为了节省费用。节省下来的那几百块钱, 有可能致使需要进行几周的重复实验。
我最后想说的
并非植物ELISA就那般玄乎, 然而的确较之动物ELISA存在更多的坑。当试剂盒选对之时, 后续便会顺利；要是选错了, 从起始至结束都会很别扭。
要是你此刻正因为实验结果呈现出不稳定的状况而感到头疼不已, 说不定可以回过头去查看一下试剂盒的适配性情况。有些时候并非是你的自身存在问题, 而是工具方面出现了问题。
从另一个角度去思考, 在进行科研的时候难道不正是于不断尝试错误的过程当中去寻觅正确的道路吗? 当试剂盒挑选错误之时更换另外一个, 这总归比例直憋闷着要好得多呀。
