说实话，这玩意儿刚接触的时候真是一头雾水。
我查阅了数量多得难以确切知晓的文献, 论坛之中争吵声此起彼伏, 有的人宣称这个名牌不错, 有的人讲那个批次存在毛病, 看得越多内心越觉杂乱, 看得越多心里越发没底。
之后, 我索性不再去看那些充满花里胡哨之感的宣传内容了, 而是直接专注于盯着几个指标, 然后一个个地去进行对照。
重组抗体到底好在哪
大家都说它稳定。但稳定是什么意思？
也就是说, 同一批与下一批之间, 差别极微小, 小到能够忽略不计。它不像传统抗体那样, 一旦更换批次, 就完全变了模样, 导致实验数据无法衔接, 进而需要重新去摸索相关条件。那种感受, 做过此类事情的人都明白。
依赖基因工程的重组抗体, 实际上就是将用于编码抗体序列的基因, 转入到表达系统当中, 使其自行生长。所有批次均源自同一个种子细胞, 并不会出现偏差。
还有一点，纯度是真的高。
传统方法是依靠免疫动物进行的, 于是血清当中存在着一堆杂乱无章、纷繁复杂、形形色色的东西。而重组抗体则是直接通过一步纯化被提取出来的, 其杂蛋白数量稀少，致使背景显得格外干净。当开展Western blot这项工作的时候, 条带呈现出清清爽爽的状态, 根本无需进行反复地折腾、翻来覆去的鼓捣。
买重组抗体最怕什么
怕买到假货。
并非是那种虚假, 而是标签与实际不相符合, 存在差异。有一些公司宣称纯度为99%, 然而当拿去跑个胶查看时, 却发现杂带比主带还要明亮。另外还有一些公司声称特异性良好, 可是一旦进行IHC操作, 呈现出来的却是一片黄色, 所有组织都被染色了。
所以我现在筛选的时候，会看三个东西：
查看一下序列信息究究竟竟是否是公开的, 真正实实在在靠谱的供应商, 是会告知你重链轻链的序列的, 或者最少少少也要给出明确的克隆号, 那些遮遮掩掩藏着掖着的, 大多多数数是存在问题的。
去查看验证数据是否齐全, 仅有一张WB图不行, 得去看内源性验证, 瞧瞧是不是真的能够捕捉到目的蛋白, 而非过表达所致的假象！并且 , 还要查看有无敲除验证。
瞅批次之间的一致性报告。好多公司会主动给出这个。要是他们讲“每个批次都搞质控”, 那就得瞧瞧他们具体测试了啥, 浓度、纯度、活性, 一处都不能少。
怎么根据实验选
不同实验，对重组抗体的要求不一样。
要是进行流式操作, 其关键之处在于荧光标记所具备的稳定性, 有的重组抗体在完成标记之后, 放置两个月的时间, 信号就降低了一半, 而质量优良的产品, 就算放置半年也都不会出现问题。
倘若进行 ELISA 操作, 那么会更加注重配对所呈现的效果, 存在一些公司能够给予配对方面的推荐, 借此避免你亲自逐一去尝试。
进行免疫沉淀操作时, 需要留意抗体是否能够有效地捕获处于天然构象状态的蛋白。仅仅依靠查看序列是无法推测出来的, 必须依据实际的pull-down结果才行。
在下订单之前, 我通常会去查看一下那个抗体是否被同行引用过, 要是在一篇高分文章里使用了, 那么基本上不会出现问题, 当然, 要是新出的产品不曾被引用, 那就去看他们自己所公布的数据。
一个小众但管用的技巧
很多人买重组抗体只盯着品牌。其实更重要的是看表达系统。
有些公司借助HEK293细胞来进行表达, 而有些公司则采用CHO细胞来表达 , 这两种系统所产出的抗体, 其糖基化修饰并不相同, 虽说对于大多数的应用而言并没有影响, 然而要是开展某些特殊的实验, 像是测定与Fc受体的结合情况, 差异便会显现出来。
存在一些公司, 它们运用大肠杆菌来表达片段抗体, 这种抗体价格较为低廉, 然而分子质量相对大一些的全长抗体却无法获取。
所以买之前，问清楚表达系统是什么，不丢人。
大实话
写到这里，其实没有哪个品牌是万能的。
有的人运用A家的去做WB时, 跑得速度飞速如同飞起一般, 然而更换成B家的之后, 却呈现出不行的状况。反过来这种情形也是极为常见的。关键之所在是自身的实验体系必须要与之相匹配才行。
当下我的习惯为, 对于新项目, 先购置若干试用装, 针对同一批样品, 全都运行一遍, 找出那一个与我的体系最为契合搭配的, 便采用那一个。虽说会耗费些许时间, 然而后续半年时间均可无需操心。
那重组抗体此物, 往浅了讲, 实则就是工具。而工具究竟是好用还是不好用, 只能经由自身亲自去试用一番之后, 才能够确切知晓。
别看太多评测，别信太多广告。
自己动手，最踏实。
