实则我撰写此篇内容之际, 窗外正飘落着雨, 并且实验室当中的离心机仍旧在发出嗡嗡的转动声响。
从事抗体研发快十年了, 我见识过好多人, 一听到“重组抗体”这四个字, 第一反应便是——, 那个价格是不是很贵? 那个做出来靠不靠谱? 那个和我当下正在使用的传统抗体有啥不一样的地方?
说实话，这种问题问得我耳朵都起茧了。
但你可晓得呀, 实实在在促使我拿定主意撰写这篇内容的, 乃是上一周的时候, 有着一位刚刚完成学业毕业的年轻而资历尚浅的女性师弟或师妹。她蹲伏在走廊之处悲伤哭泣着, 表明又一次进行了实验操作, 然而再次遭遇了失败的结果, 她的上级即那位负责人声称要是再拿不出相关数据就要更换研究课题。她手中紧紧握着一管凭借自身努力纯化制作出来的抗体, 就连上面的标识都已经磨损得模糊不清了。
我向她发问, 询问她所使用的究竟是重组抗体还是腹水, 她瞬间愣了一下, 随后说道, 呃, 老师指示要用什么我便使用什么。
嗯, 差不多就是从那一个时刻开始, 我感觉应该得有某个人把这一件事情讲述明白 , 并非是教科书中记载的那种模式, 而是真正从事实验的人能够理解、可以运用的那一种。
啥是重组抗体？一句话说人话
暂且先别去理会那些论文中拐来拐去的表述, 事实上重组抗体是这样的, 是科学家于培养皿之内制造出来的抗体, 并非从小老鼠肚子里提取出来的。
嘛没错, 正是那个腹水方法。往昔的长辈没准仍存续运用, 朝着小鼠的腹部之内注入肿瘤组织, 待其腹部呈现鼓起状态, 随后借助一支针管抽吸出来。讲真的呀, 每当脑海中浮现出那个场景画面, 我就略微存有不忍心之感。
重组抗体并非如此, 它于细胞工厂之中进行生产, 具备标准化的特性, 能实现控制, 并且表现稳定。
我要跟你讲述一件真实发生的事情。我早前存在一位师兄, 此人性格极为固执呆板, 他坚定地拒绝采用重组抗体, 缘由是他认定那东西并非正统。在连续三个月的时间里, 他所做的Western blot条带呈现出时而出现时而消失的状况, 这一情形激怒得他将相关的膜扔到地面上并踩踏了两脚。随后我暗中为他更换成了重组抗体, 而他竟然全然没有察觉, 还对着我吹嘘声称这一批次的抗体终于变得稳定了。
我没忍心告诉他真相。
为什么你的实验总是翻车？先别急着怀疑自己
做实验这种事吧，有时候真的是玄学。
但倘若你认真地去复盘一回, 就会发觉好多的翻车情况根本并非是属于你的问题, 而是因为抗体自身原本就存在着不足。
传统多抗, 每一批次都存在不同, 本月购置的与下月购置的, 或许全然不是同一情况。这是为何呢? 缘由在于每一批皆是从一只刚免疫过的动物躯体中获取的。动物存在个体方面的差异, 故而你的实验数据自然也会有差别。
可重组抗体并非如此, 其基因序列是明确的, 只要表达体系保持稳定, 每一批次均相同, 若你购置一批置于零下八十度, 三年后使用, 与今日使用, 几乎不存在差异。
我存在一位于工业界从事QC工作的朋友, 他们当下进行的全部放行检测单单只用重组抗体, 为什麽会这样? 原因在于, 当FDA审评之际, 人家会向你提出这样的问题: 你要怎样去确保你批间的一致性? 倘若你采用腹水法, 那你要怎样去证实你下一批次与上一批次是相同的?
答不上来吧。
所以有时候，不是你不行，是你手里的工具不行。
重组抗体到底贵不贵？算笔账给你听
我知道，一说“重组”，很多人第一反应就是贵。
确实，单价比传统抗体贵一些。但你算过总账吗？
针对传统抗体, 你是不是得去验证批次? 要是假设来了一个新的批次, 那你是不是得去做至少三次验证实验? 分别考量一下特异性如何, 还有灵敏度状况怎样, 以及稳定性表现如何。经过这三轮实验之后, 试剂的花费是多少、耗材所花费用是多少、耗时又耗费了多少时间, 把这些加起来总共得多少钱？你能在一周内做完一个验证就已经算是不错的了, 在这一周时间里, 你原本能够去做多少实验?
并且, 要是验证没通过咋办呢? 退回去, 重新进行预订, 接着再等两周时间, 之后再次验证。如此一来一往, 一个月就这么过去了。
重组抗体怎样呢, 是有着同一个克隆号的那种, 是具备同一个序列的那种, 是采用同一个表达体系的那种。你在第一次的时候已经验证过了, 那么在后续就可以使用它, 且几乎不需要再次重复进行验证了。
因此, 实际上仔细核算起来, 重组抗体的确相对更加节约成本, 只不过这种账目计算并非那么一目了然。
怎么选重组抗体？别光看价格
市面上的重组抗体五花八门，怎么挑？
瞅表达体系, CHO细胞所表达的那种, 通常糖基化修饰更趋近于天然状态, 适宜用于功能实验。HEK293的也挺好的, 不过产量兴许会低那么一些。大肠杆菌表达的, 价钱低廉, 然而却不存在糖基化, 开展某些实验或许是不行的。
考量纯化方式, Protein A/G纯化的情形下, 通常纯度能够满足使用需求, 然而要是进行体内实验或者特别敏感的检测, 建议选取亲和层析加上离子交换这种两步纯化的方式。
对待验证数据予以查看, 靠得住的供应商会为你呈上详尽的验证数据, 其中含有Western blot、IHC、IF、FC, 凡是应具备的均不可或缺, 缺失验证数据的，即便价格低廉也切莫购置。
我所踩过的, 堪称最大的坑, 乃是贪图那便宜, 从而买下了一个未曾验证数据的, 被称作“科研级”的重组抗体。而后进行了Western实验, 结果那背景黑得如同锅底一般。
小实验室怎么用得起？试试这个方法
我知道很多小实验室预算紧张。但也不是完全没办法。
给你传授个办法, 是联合采购, 要是你所在的学校, 或者你身处的研究所, 存在好几个课题组, 而且都在使用相似的抗体, 那么就能够一同去找供应商进行洽谈, 由于数量多就会有优惠, 所以价格能够降低许多。
另外, 存在一些供应商是会有试用装的, 尽管其数量十分少, 然而却足以供你去做好几次非常重要难以忽视的关键实验并借此加以验证, 要是好使的话再去购买正装, 要是不好使那就更换成另外的一家供应商。
此外, 要是仅仅进行常规的蛋白质免疫印迹检测, 并不是去追求特别高的灵敏程度, 那么能考虑某些国内的供货商家。近些年来的国产品牌取得的进步相当大, 价格仅为进口的几分之一, 质量也还算可以。
当然，做关键实验或者发大文章，还是建议用进口大牌，保险。
其实吧，工具只是工具
写到这里，我突然觉得有点好笑。
大家瞧瞧我们这些从事科研工作的人们, 每日都在为了一管抗体而陷入极度纠结的状态, 简直要愁死了。然而, 归根结底来讲, 它仅仅只是一种工具罢了。真正起到关键作用促使科研进展的, 是你所进行的实验设计, 是你所提出的科学问题, 还有你心底那颗渴望弄明白事情真实情况的心呀。
退一步来讲, 要想让工作顺利开展, 就必须先使相应工具精良适配。当使用的是一把钝刀去砍柴的时候, 倘若砍不动, 不要仅仅只怪罪自己力气如此之小。
所以，等下一次实验再度遭遇失败的情况时, 先不要匆忙地去怀疑自身的技术。查看一下你手里拿着的那管抗体, 是不是到了应该更换的时候了。
实验室里, 灯亮着, 离心机也在运转着。我心里清楚, 你会持续做下去, 毕竟, 这可是科研。
