坦言讲, 头一回碰到通用型PCR试剂盒之际, 我的脑袋瓜里充斥着满满的问号。
并非是那种呈现出“嗯这个物件好用”这般确定无疑的情形啦, 而是——“此样的东西真的切实能够达成通用的状况吗? ”。
你清楚的, 实验室当中的物品, 越是专注于单一用途就越会使人安心。通用类型的? 听起来好似是大杂烩, 什么事情都能够去做, 然而什么事情都做不到精湛的地步。
但我错了。
真的，错得离谱。
啥是通用型PCR试剂盒？我非用不可吗？
先别急着翻白眼。这个问题很真实，你以为所有人都懂？不。
PCR试剂盒呀, 是有着用于做扩增的一整套物品的, 其中包含酶、缓冲液、dNTP、镁离子等。通用型所表达的意思是, 它不会对所作用的对象进行挑剔选择。
无论你所扩增的是属于细菌的16S, 亦或是属于病毒的某一个片段, 还是属于植物的内参基因, 它大体上都能够予以搞定。
有人说：“那我干嘛不买专门的？”
这般_query_相当出色, 特定的具备优势, 将其优化至极限程度, 效率是高的、特异性是强的。然而所面临的问题在于——要是你今儿去开展_A_基因相关操作, 明日着手_B_基因相关事宜, 而后天又更换了样本的类型, 难道说你要对每一种情况都配备一整套专门的用于检测的试剂盒吗?
那冰箱得有多大？
省钱还是省心？真实账单吓我一跳
我算过一笔账。
此前我们所在的实验室, 会依据项目去购置专用的试剂盒。针对一个项目而言, 该项试剂成本大致为3000块钱。一年之中展开十二个项目, 单凭PCR试剂, 其花销便超过三万块。
换成通用型之后，同样的工作量，一年不到一万。
你说省不省？
并且并非是那种呈现出“节省了钱财然而麻烦到极致”这般状况的节省途径。通用型PCR试剂盒大体上是一次便做到位——添加样本、混合均匀、放置到仪器上, 其操作流程简易得简直无可复加。新入职的实习生, 教导一回就能够掌握。
但我要说句实话。
不是所有通用型都“通用”
踩过坑的人都知道我在说什么。
好些被称作通用型的, 其扩增效率低到了极点。同样是那一个模板, 专用试剂盒得出的Ct值是23, 通用型却能达到28。相差了5个循环, 你说这样的结果能让人相信吗?
另外呢, 处于对GC含量偏高的模板, 直接遭遇失败。无法进行扩增, 确实是无法进行扩增。你去更换条件也罢, 调整温度也好, 耗费一整天时间不断折腾, 然而最终呈现的依旧只是那条保持平常状态的基线。
所以选通用型PCR试剂盒，得看几个硬指标：
增大扩充的效率, 可不可以稳稳当当地在广阔宽泛的模板范围之内持续维持高效呢。
对于不同GC含量的模板, 其展现的表现是否一致, 对于不同片段长度的模板, 展现的此番表现又是否一致, 这便是兼容性所涉及的方面。
稳固性表现为, 放置在冰箱历时三个月后, 取出时是否仍具备可使用性。
我踩过的坑，希望你绕过
有一次，贪便宜买了个杂牌通用型PCR试剂盒。
结果呢？
弄了一批样本, 跑出来的条带模糊得如同马赛克一般, 进行了三次重复, 三次的结果却全不相同, 在组会上被老板当众点名询问“你这个数据该如何解释”, 我当时恨不得立马找个地缝钻进去。
后来换了正规厂家的通用型试剂盒，问题全解决了。
所以, 正确的省钱方式这般, 于确保质量的情况当中省钱, 而非通过牺牲质量的方式来省钱, 是这样的情形。
这句话值一万块。
通用型PCR试剂盒的隐藏用法
说个你们可能不知道的。
后来, 我们实验室观察到, 通用型PCR试剂盒并非仅局限于常规扩增用途, 它居然还能够被应用于初步筛选实验的开展方面, 这可是新发现呢。
比如说, 你需要在一堆样本当中找出哪些属于阳性, 直接运用通用型跑上一轮, 对于Ct值低于某个阈值的, 再使用专用试剂盒进行精确定量, 如此一来既快捷又节省, 效率实现翻倍。
当然, 并非所有场景都适用于这个方法。然而, 要是你手头样本数量众多且预算受到限制的情况下, 这个思路是绝对值得去尝试一番的。
那些人适合用？那些人最好别碰？
我试着列个清单：
推荐用：
实验室样本类型多样，今天做细菌明天做病毒
预算有限，想在不影响结果的前提下省钱
新手多，不想花时间培训复杂的操作流程
做初步筛选、预实验、大规模普查
慎用：
需要极致灵敏度和特异性的临床诊断（注意没提医院）
模板极度复杂、GC含量极端（比如超过75%）
对Ct值精度要求极高的定量实验
不是通用型不好，是工具要选对场景。
最后说点掏心窝子的
做实验这么多年，最大的感触是——不要迷信“专用”两个字。
有这么一种在行业里头比较奇怪的风气, 总是会觉得专门用于特定方面的肯定是要比普遍适用于多种情况的要好, 可实际上并非必然是这样的, 好多在多种情况都能适用发挥作用的PCR试剂盒, 它们所具备的技术已然是格外成熟了, 其性能并不比专门针对特定用途的要差, 然而价格却要便宜相当大的一部分。
关键是你得会选。
该如何进行选择呢? 需查看数据, 需察看口碑, 需留意品牌。切莫仅仅去看宣传页之上那些华美的言辞, 寻找到有过相关使用经历的人去询问一句“实际运用起来究竟是怎样的状况”, 这比任何其他方式都更具效用。
要是你才开始用通用型PCR试剂盒, 我的提议是, 先去买小包装试着用用, 进行几个不同模板的操作瞧瞧效果怎样, 在没有问题的情况下再开展大量采购。
别问我怎么知道的。
都是泪。
