实情是, 当我头一回听闻“酶标记抗体”这四个词语之际, 脑海之中遍是混乱。
什么样的抗体? 什么样的酶? 居然还要进行标记? 那时实验室的师兄递给我一管呈现透明状态的液体, 并且说道“拿着, 这是被标记的抗体酶, 千万别弄坏了”, 我整个人处于发懵的状态。那种感觉恰似刚刚取得驾照便被丢到高速公路上, 还要求你在驾车的同时去修理发动机一般。
但后来我发现，这东西其实没那么玄乎。
酶标抗体到底是个啥
简而言之, 是将一种酶（举例来说, 像辣根过氧化物酶, 即HRP, 名字听起来令人惊悚但实际是从辣根中提取而来的）, 与一种抗体（即我们身体免疫系统里专门用于识别不良物质的那种蛋白质）, 强制性地组合成了一组。
嗯，像相亲，不过是科学家安排的。
抓目标抗原这一行为是由抗体来负责执行的, 而酶所负责的则是在成功抓到目标抗原之后发出信号, 例如使溶液发生颜色变化, 又或是让底片产生曝光现象。整个过程呈现为这般情况: 抗体充任侦察兵角色, 酶担当信号兵角色, 二者相互配合开展侦察工作。
这个东西是干什么用的
最常听说的场景就是ELISA了。
可是我并不想要跟你讲述过多的专业术语表达, 如今我们改换一种说法来进行表述。假定你身体内部感染了某一个病毒, 你想要知晓究竟有没有感染上, 该如何去做呢? 于是去抽取血液, 过后把血样放置到一个板子里, 接着再往这个板子里面添加酶标抗体。
要是那个病毒处于存在的状态, 酶标抗体便会缠绕上去, 接着添加底物, 随后液体发生变颜色的情况。
颜色越深，病毒越多。
便是这般简易, 你甚而能够将其构想作钓鱼, 抗体为鱼钩, 酶属浮标, 鱼逃窜了（无病毒）浮标静止不动, 鱼咬钩了（有病毒）, 浮标便跳动。
为什么要用酶来标记
这个问题我在实验室想了好久。
向师兄询问, 他说 “由于便利欸”。随后我自行思索, 实际上最为关键的缘由是: 酶具备敏感性, 其能够对信号予以放大。
一个抗体捕获一个抗原, 这你用肉眼是看不见的, 即便在显微镜下观察也颇费周折——然而一个酶分子能够于短时间之内催化成千上万个底物分子, 从而让信号瞬间放大起来。
这叫“信号放大”。
搞不明白亦不为妨, 只需记取: 酶标抗体恰似一扩音器, 将原本难以听闻之微弱声响放大为响亮喇叭。
它是怎么被做出来的
这个过程听着挺技术，其实逻辑很直白。
把抗体先提纯弄出来, 接着选用一种温和的交联剂, 而后使酶跟抗体连接到一块儿。在这儿存在一个关键要点——酶与抗体绝不能够随意地搅拌掺和在一起, 不然它们要么无法实现反应, 要么反应程度过度进而直接报废掉。
得控制比例、控制pH值、控制温度。
像谈恋爱，火候不到不行，过了也不行。
质量上乘的酶标抗体, 具备稳定特性、灵敏特质, 且不会出现胡乱结合的状况。质量欠佳的酶标抗体, 一旦加入反应体系之中, 便即刻开始胡乱作为, 背景高到令人惊恐, 致使结果根本无法进行观察。
我在实际用的过程中踩过的坑
讲点真事。
曾有一回, 我在进行酶标抗体稀释操作之际, 随意选取了一瓶旧的稀释液, 未曾查看它的保质期。最终整块板子全然变黄, 状若调色盘。师兄瞅了一眼, 当即放声大笑道: “你这般行径, 究竟是在搞艺术, 还是在做实验呢? ”。
之后才弄清楚, 稀释液当中存在叠氮钠用于防腐, 然而要是存放太过长久, 或者pH出现偏差, 酶就会失去活性。失去活性的酶标抗体好似一个不会呼喊的侦察兵, 即便抓到了抗原也无法发出信号。
所以，现在我做实验前都会先检查稀释液，不偷懒。
存有一回, 本人在清洗板子之际, 遗漏添加吐温了——此乃那起着协助洗去非特异结合之物作用的东西。结果背景变得极高, 仿若涂抹了颜料那般, 最终只能重新进行操作。自那之后, 本人养成了一个习惯, 于洗板之前必定会先瞧上一眼配方。
真的，这些小细节，一个不注意就是一张废板子。
怎么判断你手里的酶标抗体质量好不好
这个其实没那么难。
你能够去开展一项小型的实验, 选取一管有着明确已知浓度的标准抗原, 将其依照梯度进行稀释之后放置到板上, 随后添加你手上持有的那个酶标抗体, 以此来查看它的检测灵敏程度。
如果它能把很低的抗原浓度都检测出来——那就还行
如果它只能检测高浓度的——那就差点意思
如果连高浓度都测不准——那赶紧换
并且, 查看背景情况。背景倘若过高表明非特异性结合状况严重, 其原因有可能是抗体纯度不足够, 还有可能是酶标这个过程致使抗体被损坏了。
有效的酶标抗体, 应当是, 在理应出现信号的地方, 信号表现强烈, 而在不应出现信号之处, 其信号近乎为零。
保存有讲究吗
当然有。
大多数量的酶标抗体都需要在二至八度开展保存, 千万不要进行冷冻。一旦进行冷冻, 酶就会失效了, 抗体的结构也存在被破坏的可能性。有些产品当中添加了甘油, 能够进行短期的冷冻, 不过最好还是依据说明书来操作。
使用期间需避免光照, 酶对光敏感, 特别是HRP标记的那种, 一旦置于阳光下暴晒片刻, 其活性便会大幅下降。
除此之外, 不要反复去取用。每一次用完之后, 要赶快把它放回到冰箱里面, 不要让它在桌子上放置太长时间。一旦温度出现波动, 蛋白质就会开始发生变性, 谁都无法挽救。
直到如今我依旧记得, 第一次成功做出ELISA曲线的那次, 看到那条呈S形的曲线, 那会儿我目不转睛地瞅着电脑屏幕, 愣神了好一阵子。
我并非因自身有多厉害, 而是因我知晓其背后曾踩过多少坑。稀释液忘掉更换, 洗板时忘掉添加吐温, 抗体加至过量, 孵育时间过长……每一个坑都值得给出一句“别学我”。
酶标抗体此物, 言其复杂亦复杂, 称其简单亦简单。若将其视作工具，弄明白其如何使用, 知悉其如何保存, 晓得其如何判定优劣, 便可始终良好运用之。
别怕。
犯错就犯错，重要的是下一次你能做对。
