疲倦。于实验室之中最惧怕的是什么呢？并非是无法得出相应的成果, 而是每一次更换模板之际都得再度去购置试剂盒。
你去思索一下, 冰箱里头堆放着林林总总的特异性试剂盒, 有一个牌子用于检测A基因, 另外一个牌子则是检测B位点, 刚把冰箱门打开便不由得犯起头疼来。老板询问经费为何又超出预算了, 你仅仅能够无奈地苦笑。在科研圈子里存在着这样一句话: 试剂盒购置得是否恰当, 会直接对月底你能否吃到肉产生影响。
通用型PCR试剂盒是智商税吗？
不, 确实不是这样。以往我也曾有过怀疑, 心里认为“通用”这两个字听起来好似“任何事情都能够去做, 然而任何事情又都没办法做得精细”。可是后来在受到逼迫的情况下尝试了一回, 结果发觉真的很不错。
它背后所蕴含的逻辑实际上是颇为简易的, 运用优化聚合酶的保真程度以及延伸速率的方式, 再增添一套缓冲体系, 从而使得同一管试剂能够适配不同的模板以及不同的引物。你对此持有怀疑态度吗? 那就去查阅文献看看, 众多高分文章里的实验部分都明确记载着“使用通用型PCR预混液”。人家并非是愚蠢的呀。
为什么你的PCR老是跑不出条带？
时而并非是引物设计方面存在问题, 而是你所选用的试剂过于“挑剔”。特异性试剂盒对于GC含量以及模板纯度有着较高要求哪怕稍有杂质便会停止工作。通用型则反倒宽容许多就如同一位脾气和善的老教授无论给他何种样本他都能将其扩增出来。
我有一位同学, 他在进行环境样本处理时, 所面对的腐殖酸数量多得足以令人感到十分惊悚, 使用特异性试剂盒扩增后呈现出的全都是污迹模样。而后他更换为通用型试剂盒, 结果条带清晰得让他内心那种想哭的情绪油然而生。
省钱这件事，实验室财务比你在乎
掰着指头合计合计这账。设有一管被称作通用型的PCR Mix, 它具备能完成100个20μL体系操作的能力, 其所需付出的钞票数额大体上等同于两杯奶茶的价值付出。假设使用的是特异性试剂盒, 那么单个反应所产生的成本会成倍增长且不止于此。要是一个月进行几百个这样的反应操作, 节省下来的资金数额能够为实验室购置一个全新的离心管架——或者用于请师弟享用一顿火锅。
进而管理成本同样处于较低水平, 存有一个通用型的, 任何实验均可承接, 无需每次去查阅表格来比对不同试剂盒所适用的模板, 不必为这个试剂盒能否扩出长片段而陷入纠结状态。
但通用型也有翻车的时候
有的情况并不适宜, 比如说你打算开展超高灵敏度的单拷贝检测, 又或者是扩增超长片段（大于5kb）, 这种时候就得采用专门优化的试剂盒。通用型所追求的是“能用、好用、够用”, 并非“极致”。
再有一事, 不同品牌的通用类存在极大差别。有些通用类实际上是“伪通用”, 更换一个模板便会出问题。莫要问我何以知晓, 我的垃圾桶里尽是尝试错误所付出的代价。
那怎么挑到靠谱的通用型？
盯着聚合酶瞧, 最好是那种历经定向进化的突变型Taq, 其保真度相较于野生型要高出许多。其次, 瞅一瞅缓冲液, 有些品牌添加了特殊稳定剂, 具备抗抑制物的能力。再者, 留意一下售后, 敢于让你免费拿试用装的品牌, 一般而言对自身产品颇具信心。
别盲目迷信进口的东西。如今国产的通用型PCR Mix, 有一些制作出来的效果真的不比进口的差, 而且价格还比较亲民。我最近使用的一款, 其扩增效率高到超乎寻常的地步, 32个循环的Ct值比进口品牌低1.5。关键所在这是便宜呀, 以至于老板看了报表都露出了笑容。
实验室的真相：没有完美试剂，只有合适的工具
并非万能钥匙的通用型PCR试剂盒, 却能够搞定八成常规扩增问题。对于每日需处理大量各异样本的实验室而言, 它便是靠谱的“万能替补”。你毫无必要在每次实验以前都去祈祷试剂表现良好, 也没有必要去囤积好几种不同规格的管子。
把时间省下来干嘛？好好设计实验，好好分析数据，好好睡觉。
别使得PCR试剂盒变成你所进行实验的障碍所在, 它仅仅是一种工具而已，而你才是那个能够促使科学得以发生的人。
