先别急着翻大牌目录
说实话，搞实验的人谁没在试剂盒上踩过坑。
在早些年的时候, 我才刚刚开始进行PCR操作, 猛然间老板抛掷过来一本篇幅厚实的目录册, 随即要求我凭借自身去挑选试剂盒。呈现出众多不同类目, 诸如“高保真”“快速扩增”“GC‑rich优化”等等, 这般繁杂的名目着实令人看得头皮阵阵发麻。最终我购置了三四个来自不同品牌的试剂盒回来展开试验, 然而实际情况究竟如何呢? 其中有些试剂盒的扩增效率倒是颇为可观, 可特异性却差强人意, 还有些试剂盒的稳定性表现良好, 但其价格却昂贵到令人瞠目结舌, 简直离谱。
然后, 实验室里那位资历较深的大哥跟我讲了一番话, 直至如今 我依旧清清楚楚地记得, 他说: “你别再这般反复试探摸索了, 径直去采用那通用型的PCR试剂盒就行。”。
起初我是不信的, 认为“通用型”这三个字, 听起来好似“万金油”, 干什么都行, 可干什么都难以做到精通。然而在用过以后才晓得, 这物件才是真切明白打工人苦心的事物。
为什么实验室老手都在偷偷用通用型？
这事儿你要是细想，其实挺有意思的。
进行PCR操作的多数人, 日常通常是, 开展常规基因检测, 实施克隆鉴定, 偶尔做突变验证。这些工作, 根本无需那些花哨的“特种兵”试剂盒。
通用型的PCR试剂盒, 其核心的逻辑是唯一的一个, 那就是稳。
模板范围宽：基因组DNA、cDNA、质粒DNA，来者不拒
GC含量容忍度高：30%-70%基本都能搞定
退火温度宽容：不用每次抠着温度算半天
重复性好：同一批试剂盒，不同人操作，结果差不多
实而言, 其并不挑拣食物。此情形就如同于食堂之中你选取了一份“盖浇饭”, 虽说并非是那种米其林星级的豪华大餐, 然而绝对能够让人吃饱, 且不会出现令人失望的状况。
省钱这事儿，真不是小账
咱们说点实际的。
这实验室经费呀, 只要是干过几年的人呢都清楚, 看着好像数量不少, 可实际用起来那是真不够用。一管特种试剂盒动不动就要几百块甚至上千块, 不过通用型的价格常常却只有特种试剂盒的三分之一, 甚至还要更低。
并且, 通用型试剂盒存在着非常关键的一个优势, 那便是: 库存管理较为简便。
你仔细去想一下, 要是你在实验室里, 同时准备着专门用于高GC的产品、专门针对长片段的产品、专门进行快速扩增的产品等等, 仅仅是过期这一方面的问题, 就足以让你感到头疼不已了。然而呢, 要是你仅仅准备一款通用型的产品, 那么库存方面的压力就会急剧下降, 并且每当采购的数量增多了, 还能够压低价格。
同行跟我讲, 他们团队自去年起, 全面换成通用型PCR试剂盒, 之后一年, 光试剂成本就省下将近两万块, 这笔钱足以买一台较好的移液器了。
但通用型真的万能吗？
说实话，也不是。
有些特殊场景，通用型确实搞不定。比如：
超长片段扩增（>5kb）
极高GC含量（>75%）
高度重复序列
需要超高保真度（比如NGS建库）
遭遇这些情形时, 那特种试剂盒还是得用。只是问题在于, 你所拥有的实验里究竟有多少是属于这种情况的呢。
就我自身所拥有的经验而言, 实际上真正牵涉到需要特殊试剂的那些实验, 大概仅仅占到了10% - 20% , 而剩余下来的那80%的工作任务, 通用型的都能够承接下来。
挑通用型PCR试剂盒，看哪几点？
既然说到了这儿，顺便分享几个我自己挑通用型试剂盒的土办法。
看酶的热稳定性
别轻信广告, 自行去做一回梯度PCR尝试一下。设置成55℃至65℃的退火梯度, 完成之后瞧瞧条带情况。质量优良的试剂盒在整个这个区间之内都能够出现清晰的条带。
看扩增效率
将同样的模板以及引物, 拿去跟你所知晓的“神盒”进行对比, 然后跑一次。倘若通用型差得并非太多, 那么就算过关。
看批间差
购进两批不一样批次的试剂盒, 运行相同的体系。要是结果差异显著, 那么这个牌子的品控存在问题。 标点符号需根据具体情况进行调整, 这里仅作示例。
就连那些徒有其表、不切实际的所谓“专利技术”又或是声称有着与众不同之处的“独特配方”, 你仅仅听听也就罢了, 重点嘛, 终究还是得去看那实验所获取的数据。
最后说点真心话
做实验这事儿，有时候真的没必要把自己搞得太累。
PCR这项技术, 已然发明三十多年了, 到了如今今日, 通用型试剂盒的技术已然相当成熟, 你耗费大价钱去购置那些“高精尖”的产品, 许多时候实际上是在为品牌溢价掏钱, 并非是在为实验效果付钱。
当然了, 我并非是讲所有的通用型一概都是好的。在市场当中, 的确存在着一些通用型试剂盒, 其质量令人担忧, 具体表现为扩增效率较为低下, 非特异条带数量众多, 重复性相当之差。所以呀, 在进行选择之际, 还是必须要对多家进行比较, 瞧瞧同行所拥有的口碑, 自己亲自去开展一些对比实验。
设若要是你寻觅到了那个适切的通用型PCR试剂盒, 那么请你务必相信我所说之意, 它绝对是你实验室之中最值得予以储备的耗材当中的一个呀。
省心、省钱、省时间——这三样东西，比什么都金贵。
总归来讲, 咱们开展实验的最终目的, 并非是与试剂盒进行较量, 而是要达成实验的完成, 使数据呈现出较为良好的状态, 并且成功将论文发表出去。
通用型PCR试剂盒，就是那个让你少走弯路的伙伴。
