说实话，做实验最怕什么？
并不是数据没办法跑出来, 而是明明依照着说明书一步一步地去操作, 可是最终出来的结果却是呈现出一片空白的状态, 又或者条带模糊得如同在雾里看花那般让人难以分辨清楚。
那种心情，真的想把手里的移液枪给摔了。
特别是在你急切地需要数据来发表论文, 或者迫切地着急推进项目进展, 处于时间等同于金钱的这种状况下, 每一分钟的等待, 都仿佛如同处于煎熬之中。
这时候，“快”就成了唯一的信仰。
很多人以为PCR就是个简单的加热冷却循环，没什么好说的。
大错特错。
于反应体系之中的每一个成分而言, 酶的热稳定性, 缓冲液的pH值平衡, 引物的特异性, 其中任何一个出现差错, 整个实验便会走向崩盘。
市面上, 有着诸多被称作“快速PCR”的产品, 其广告宣传得极为响亮, 声称仅需15分钟便能完成搞定。
听着很诱人对吧？
可是当真正投入使用时, 你能发觉某些品牌的确速度快, 然而其特异性糟糕透顶, 非特异条带多得会令你对人生产生怀疑。
另外存在一些品牌, 其行动迟缓, 尽管最终结果具备干净的特性, 然而等你完成相关事宜时, 头发已经掉落了相当数量。
因此, 挑选快速PCR扩增试剂盒, 实际上便是于寻觅那个微妙的平衡点。
快速PCR扩增试剂盒真的比传统的好吗
这个问题，不能一概而论。
得看你的样本类型，还有你的目的。
若是你的样本极为纯净, 举例来说就是质粒DNA, 又或者是培养好的细菌基因组, 那么传统的PCR或许就足够了, 并不一定非要去追求极速。
毕竟, 做事讲究慢工出细活, 有时候多花费半小时, 便能够除掉许多存有的潜在污染风险。
不过, 要是你所面对的是繁杂的样本, 像是组织裂解液、血液, 甚至于那些历经艰难提取、纯度普通的DNA的那些样本。
这时候，传统酶的反应效率可能会因为杂质而大打折扣。
抑制剂的存在，会让酶“消化不良”。
这时候，一个高效的、耐受性强的快速聚合酶就显得尤为重要。
它能够于更短的时间段之内, 达成链的延伸, 削减因温度波动所引发的非特异性结合。
简要来讲, “快”不单单是为了节省时间, 更是为了在那种恶劣环境之下能够“活得更为出色”。
我见识过好些同行, 为了节省那一小笔试剂费用, 而去购买价格低廉的普通试剂盒, 如此一来, 他们反复地去优化条件, 这般折腾持续了一周时间, 最终却发觉连一条清晰的条带都未曾出现。
这时间成本，算下来比买贵的试剂盒还要亏。
所以，别只看单价。
要看成功率，看重复性。
一次成功，胜过十次失败后的重来。
快速PCR扩增试剂盒选购有哪些关键指标
别被那些花里胡哨的宣传语骗了。
什么“独家专利”，什么“全球领先”，听听就好。
真正有用的，是那几个干巴巴的参数。
扩增速度。
这个不用多说，大家关心的核心。
但要注意，它是在什么条件下实现的？
是标准循环参数，还是优化后的超短循环？
假如是后者这种情况, 那么你或许要再度调整你那热循环仪的程序, 甚至于有可能得去确认你的仪器升温及降温的速率是不是能够赶上要求。
存在一些老式的仪器, 其升降温度的速度较为缓慢, 要是强行去使用快速程序, 那么反而会致使均一性变得更差。
保真度。
快，往往意味着酶的工作节奏紧张。
如果酶的校对功能跟不上，错配率就会升高。
对于普通的终点检测，比如看个条带大小，这可能无所谓。
但如果你是要克隆，或者做测序，那保真度就是生死线。
非得要看清那说明书之上所标注的错误率, 最为好是去选带有3'-5'外切酶活性的那个版本。
灵敏度。
能不能检测到低拷贝数的模板？
这点在微量样本检测中至关重要。
有些快速试剂盒, 为了追求那种速度, 就牺牲了灵敏度, 结果致使对弱阳性样本无法检出来, 造成这种状况。
这就很尴尬了，明明有东西，你却说是阴性。
易用性。
是不是预混好了？
是不是开盖即用？
目前的趋向是2x Master Mix, 缓冲液被配好了, 酶也配好了, dNTPs同样配好了, 你仅仅只需加入模板以及引物。
这样能最大程度减少人为操作误差。
特定地, 针对那些新手, 或者高通量筛选的情景, 一步法操作能够省却数目可观的麻烦。
快速PCR扩增试剂盒在实际应用中的常见误区
即使买了最好的试剂盒，用错了也是白搭。
我见过太多人，拿着快速试剂盒，还沿用以前慢速PCR的参数。
比如变性时间设得太长，或者退火温度太低。
快速PCR的核心在于“紧凑”。
变性时间短，退火和延伸速度快。
倘若你依旧依照老的方式, 94度进行变性30秒, 那么不但会造成酶活性的浪费, 而且还有可能致使模板降解。
另外，引物设计也很关键。
快速反应对引物的Tm值要求更严格。
万一引物设计欠佳, GC含量要么过高, 要么过低, 要么形成二聚体, 在快速循环这种情况下, 这些问题会被放大。
所以，不要指望靠试剂盒来拯救糟糕的引物。
进行引物设计, 那是得切切实实地依照原则来做, 最好借助软件对二级结构予以预测。
还有，模板的质量。
再好的试剂盒，也架不住模板里有乙醇残留，或者有蛋白污染。
提取DNA的时候，一定要彻底洗涤，晾干，但不要过干。
过干的沉淀很难溶解，容易导致浓度不均。
溶解后，最好短暂离心，确保管壁上的液体都沉到底部。
这些小细节，决定了实验的上限。
快速PCR扩增试剂盒的未来发展趋势
技术总是在进步的。
如今的快速PCR, 基本上都能够在30分钟至60分钟范围内, 达成一个标准的、在2kb以内片段的扩增。
但这还不够。
大家都在往更快速、更便捷的方向走。
比如，等温扩增技术的结合。
对于现场检测而言, 对于基层实验室来讲, 虽然严格意义上等温扩增并非属于PCR, 可是却不需要热循环仪, 故而其吸引力十分巨大。
然而, 等温扩增所具备的特异性, 以及其灵敏度, 当前暂且处于朝着传统PCR不断追赶的进程之中。
另一个趋势是数字化PCR的结合。
dPCR自身速度迟缓, 然而前处理具有快速化的特性, 并且反应体系呈现微型化的特点, 致使整体流程趋向于更为高效。
还有，针对特殊场景的定制化试剂盒。
比如说, 有针对高GC含量模板的特别配方, 又有针对抑制物耐受型的强化配方。
这些细分领域的产品，会越来越丰富。
对于消费者来说，这意味着更多的选择，但也意味着更多的困惑。
怎么选？
没有标准答案。
只能根据自己的实际需求，去试错，去对比。
我的建议是，先买小包装试用。
别一下子囤一大箱，万一不适合你的样本类型，那就浪费了。
小包装成本不高，正好可以用来摸索最佳条件。
找到那个最适合你的“黄金组合”，再考虑长期采购。
实验这事儿，就像谈恋爱。
合不合适，只有试过才知道。
别听别人吹得天花乱坠，自己的数据不会撒谎。
在凝胶电泳里, 你见到那清晰的条带, 那明亮的条带, 那无杂带的条带时, 那种成就感, 是任何言语都没法替换的。
那一刻，所有的等待和焦虑，都烟消云散。
所以，别再纠结于那些虚无缥缈的广告词了。
关注参数，关注口碑，关注实际效果。
挑中恰当的快速PCR扩增试剂盒, 致使你的实验效率实现成倍增长, 使得你的科研道路减少了些许崎岖不平, 从而增添了更多从容不迫。
终究, 将时间投放于更具价值的思索以及创新之上, 而非耗费在等候PCR结果这件事上, 这才是我们开展研究的原本意图, 难道不是这样吗?
