实话讲, 涉足分子生物学这个领域呢, 最叫人抓狂的并非是实验搞砸了, 而是明明每一步骤都不存在差错, 然而最终呈现的结果却是——空空如也, 什么都没有。
或者是，杂带多得像在开派对。
你可曾有过这般时刻? 为了等来一个结果, 在放置仪器的旁边守了足足两天。头发掉了一绺又一绺。最终看着呈现出来的电泳图, 心里那股难以言说的无力感, 当真是, 明白的人都有着深切体会。
我们往往被教导着得十分严谨, 得要慢工细才更出活, 然而在实际用于的场景当中, 特别是那些针对于时间最为敏感的时刻之际, “快 ”这情形反倒是通常会比“完美 ”更加具有重要性。
比如，当样本量巨大的时候。
或者当你的客户盯着表，问你“还要多久”的时候。
于此际, 传统的那个经历了种种流程的PCR , 宛如一位迈着蹒跚步伐的老者, 其迈出任何一步时皆是小心翼翼的, 内心俱怕发生错误。然而, 某些时候, 我们所需求的乃是一名具有战斗能力的人。一名能够快速做出反应、实施精确打击的具备斗争能力的人。
这便是为何, 越来越多的实验室, 已然着手关注, “快速PCR扩增试剂盒”。
快速PCR扩增试剂盒到底快在哪里
很多人第一反应是：快？是不是牺牲了特异性？
这属于一种颇为常见的误区, 你脑海中所认为的“快”, 或许是温度上升与下降的速度较快, 然而却忽视了酶的效率, 而实际上真正意义上的快速PCR, 依靠的是具备高性能的热稳定DNA聚合酶。
这种酶，能在极短的时间内完成链的延伸。
曾经走完一个循环得耗费40秒, 如今或许10秒便足矣。这所蕴含的意义是什么呢? 是表明整个扩增进程的时间能够缩减一半, 甚至还要更多。
试作设想, 本应于下午三点起始的反应, 四点便能够得出结果。并且你无需于彼处空自等待着去喝咖啡、刷手机, 直至天色变黑。
更为关键的是, 这般速度所带来的并非仅仅是时间被节省, 而且还有效率获得提升。
一天能做多少组实验？以前是20组，现在可能是40组。
对于高通量的筛查工作来说，这简直就是质的飞跃。
谁最需要这种“快”
并非所有的场景都必然得要那极速, 要是你仅仅是在去钻研一个并非编码区域当中的序列状况的话, 若当下不着急去将成果予以发表, 缓缓深入地去探究也并没有什么问题大碍。
但以下这些情况，真的是争分夺秒：
首先是法医鉴定。
现场所遗留下来的微量样本, 伴随着时间的每一小时每分钟, 都持续处于降解的状态之中。你必须要在最为短暂的时间范围之内, 去获取到足够数量的DNA信息, 以此来确定犯罪嫌疑人的身份。就在此时此刻, 哪怕仅仅只是慢上那么一小步片刻, 便极有可能痛失最为关键意义重大的证据。
其次是临床病原体的快速检测。
即便我们绝对不得提及医院, 然而在第三方检验中心, 以及在疾控中心, 当面对着突发的公共卫生事件之时, 迅速地识别病原体, 这乃是首要的任务。
是流感？还是新冠？或者是某种罕见的病毒？
几小时内就能给出初步判断的是快速PCR, 并非等待三天后才有的报告。
还有农业育种。
田间地头之处, 种子公司实验室当中 , 要对成千上万株幼苗开展基因型筛选工作。
一个个测？那得测到明年去。
用上快速试剂盒，一天筛完一批，效率提升的不是一星半点。
操作简便，新手也能上手
除了快，还有一个关键点：稳。
大量的快速PCR体系, 因旨在追求速度, 故而对于模板质量有着极高的要求, 只要存在些许杂质, 便会抑制反应。
但好的快速试剂盒，通常会优化缓冲体系。
它包含着特别的添加剂, 具备耐受一定程度抑制剂的能力。好比血液当中血红蛋白, 又或是植物多糖。
这意味着，你不需要把DNA纯化得如同水晶般清澈。
粗提的DNA，照样能跑出漂亮的条带。
这对于并非专业人士的群体、或者是实验条件存在限制的基层实验室来讲, 简直就是福音。
不用买昂贵的纯化柱，不用折腾繁琐的步骤。
提取，加样，上机。
三步走，搞定。
并且, 快速PCR往往只是需要比较少的酶使用量。鉴于效率是比较高的, 于是导致单位时间之内产生出来的产物变得更多起来, 试剂成本反倒有可能是会降低的。
这是一笔经济账。
避坑指南：别盲目追求速度
当然，也不是越快越好。
有着一些呈现极端快速特征的体系, 极有可能会对一定程度的灵敏度予以牺牲。要是你的样本当中目标序列的含量处于极低的状态, 举例来说拷贝数仅仅只有几个, 那么常规PCR或许更具稳妥性。
所以在选择时，要看你的需求。
如果是中等丰度的样本，快速PCR是首选。
要是属于痕量样本, 也许会需要进行预扩增, 又或者去挑选具备高灵敏度的常规体系。
另外，引物设计也很关键。
对于快速PCR而言对引物的 Tm 值要求显得更为严谨精确严格, 若引物过长那么退火过程就会遭遇困难阻碍, 要是引物过短则特异性会出现下降降低。
最好使用专门针对快速PCR优化的引物设计软件。
不要拿以前设计的引物直接套用，除非你愿意花时间重新验证。
未来的趋势：一体化与自动化
现在的趋势很明显了。
单纯的试剂盒已经不够了。
大家想要的是“样本进，结果出”的一体化装置。
把微流控技术与之相结合, 把裂解集成在芯片上, 把核酸提取集成在芯片上, 把PCR扩增成在芯片上, 把荧光检测集成在芯片上。
你只需要把样本滴进去，剩下的交给机器。
核心驱动力是这一过程里的快速PCR, 没有快的那种酶, 整个流程就没办法达成分钟级的检测。
这在即时检测（POCT）领域有着巨大的潜力。
未来, 或许于你的社区诊所, 甚至于在家里, 便能够达成繁杂的基因检测。
而不需要把所有样本都送到中心实验室。
这听起来像科幻电影，但其实技术已经在路上了。
写在最后
科学实验，归根结底是为了探索未知，为了解决问题。
在这个过程中，工具的选择至关重要。
某个称得上优秀的、具备快速特性的PCR扩增试剂盒, 它并非仅仅只是一组化学试剂的简单组合。
它是一种效率的承诺，一种对时间的尊重。
它让你在深夜的实验室里，能早点回家睡觉。
它让你在紧急的任务面前，多一份从容。
它让你在面对成千上万的数据时，不再感到绝望。
如果你正被效率瓶颈所困扰，不妨试一试。
也许，改变就从这一管试剂开始。
毕竟, 于这个节奏快捷的时期阶段来说, 使之减慢速率是一种奢侈万分的情况, 然而让其加快进展的速度, 却是一种具备的能力。
希望你的每一次扩增，都能得到那条清晰、明亮的条带。
那是胜利的颜色。
