讲真的, 头一回进行实验之际, 我对于“一抗”这两个字的领会, 着实是颇为浅显的。
以为就是买个瓶子，贴上标签，然后往样子里滴两滴，完事。
天真。
太天真了。
那一天到来之际, 我的Western Blot呈现出的结果, 要么是全然空白的状态, 要么是呈现出一团杂乱无章、毫无规律可言的噪点, 此时, 我才真切地意识到, 这般情形哪里是在购买抗体, 这简直如同开启盲盒一般, 并且, 所下的赌注竟是我历经三个漫长的熬夜时段才制作完成的样品。
一抗怎么选不翻车？
要是针对这个问题, 你选择去询问那些老手, 那么他们极有可能会给你呈上一个长长的列表, 其中涵盖宿主物种、克隆号、应用验证、浓度等等内容。
看着就头疼。
其实核心就一点：你要知道你的实验目的是什么。
难道你是打算去做WB就是俗称的蛋白印迹, 又或者是IF也就是免疫荧光，再或者是IHC即免疫组化这些实验项目吗?
不同的应用场景，对抗体的要求天差地别。
那众多新手所犯下的最为严重的错误, 在于将仅仅证实过用于WB的抗体, 拿去进行IF实验, 结果呢, 背景呈现出的状态如同刚刚拖完地的地板那般, 不仅脏污, 且布满灰尘。
抑或反之, 手持IF专用之抗体去开展WB, 信号微弱至极, 以至于肉眼根本看不到, 令人对人生顿生怀疑。
所以, 第一步, 去查看说明书里标注着的 “Reactivity”, 以及说明书里标注着的 “Applications”。
别嫌麻烦，哪怕花五分钟扫一眼，也能帮你省下好几天的时间。
为什么你的条带总是糊的？
有时候，不是抗体不好，是你没选对。
比如说, 你所研究的蛋白其分子量是非常大的, 然而你所选用的抗体识别的却是N端或者C端的一个小肽段, 并且这个肽段在提取的进程当中可能是被降解掉了, 又或者是空间位阻过大, 以至于抗体根本无法实现结合。
这时候，你就需要考虑多克隆还是单克隆了。
多克隆抗体，亲和力高，信号强，适合低丰度蛋白。
但缺点是特异性稍差，容易出现非特异性条带。
有种单克隆抗体, 它的特异性程度非常高, 其背景呈现出干净的状态, 然而它的灵敏度或许是不够的, 特别是在你的样本中目标蛋白含量稀少的情况下。
这就好比找对象。
多克隆像是“海王”，虽然容易找到目标，但容易认错人。
单克隆宛如“专一者”, 认准某一个便不再放开, 然而要是那个人隐匿起来了, 你同样寻觅不到。
没有绝对的好坏，只有适不适合。
批次差异，真的是玄学吗？
很多实验室都有过这种经历。
上个月买的同一批抗体，效果杠杠的。
这个月再买同一货号，结果信号减半，甚至完全没信号。
这时候你可能会骂厂家，说他们品控不行。
但其实，抗体这东西，生物制品嘛，难免会有批次差异。
尤其是多克隆抗体, 每次对动物进行免疫时其状态不一样, 血清进行采集的时候时间不同, 纯化所依据的条件存在差异, 这些情况都极有可能干扰到最终呈现的效果。
所以，如果你发现效果变差了，先别急着扔。
试着重新滴定浓度。
有时候，稀释倍数稍微调整一下，奇迹就出现了。
另外，保存方式也很重要。
反复冻融是抗体的大忌。
每次实验后，尽快分装，-20度保存。
别为了省那点分装管的钱，浪费掉几百块一瓶的抗体。
预算有限，怎么挑？
当然，也不是所有人都能随便买进口大牌。
国产抗体这几年进步很快，性价比高，适合初步筛选。
可是呢, 要是你打算去开展关键实验, 又或者是要发表高分文章, 为了确保稳妥, 那种经由数量众多的文献予以验证的经典抗体, 才是比较值得建议选择的。
看看PubMed上有没有人用过这个货号，效果怎么样。
如果有，那大概率不会太差。
如果没有，那就做好做炮灰的准备吧。
毕竟，科研这条路，本来就是由无数个失败堆砌起来的。
最后想说
一抗，不仅仅是一个试剂。
它是连接你样本和结果的桥梁。
选错了桥，你再怎么努力，也过不去河。
所以，下次下单前，深呼吸，多看两眼说明书，多查几篇文献。
别嫌烦。
之所以会这样, 是由于当你目睹那条清晰的、漂亮的条带在膜上呈现出来的时候, 你就会对那个认真进行挑选的自己怀有感激之情。
哪怕只是一点点的谨慎，都能避免巨大的浪费。
实验嘛，慢慢来，比较快。
真的。
