在ELISA试剂盒中，包被抗原是指被固定在固相载体（如96孔板）上的抗原。这个过程是ELISA实验中的第一步，也是至关重要的一步。包被抗原的选择和制备直接影响到实验的灵敏度、特异性和整体性能。
ELISA试剂盒在包被步骤中选取抗原时，需要考虑以下几个关键因素：
1. 抗原类型：
1) 天然蛋白：直接从生物样本中提取的抗原，如细菌、病毒或细胞等。这类抗原最接近自然状态，但可能含有杂质，需要纯化后才能使用。
2) 重组蛋白：利用基因工程技术在宿主细胞中表达的抗原。纯度较高，特异性好，通常可以直接包被。
3) 小分子抗原：例如多肽和小分子有机化合物。由于分子量小，缺乏足够的结合位点，直接包被效果不佳，一般采用载体蛋白偶联法。
2. 包被方法：
1) 直接包被：适用于重组蛋白和部分纯化良好的天然蛋白。
2) 间接捕获法：对于含有杂质较多的抗原，先用能与目的抗原反应的物质（如抗体）包被，再通过特异性反应使抗原固相化。
3. 包被液的选择：
1) 碳酸盐缓冲液：pH值范围在9.09.6，呈弱碱性，是常用的包被液之一。
2) 磷酸盐缓冲液：pH值范围在7.27.4，接近生理pH值，适用于对抗原不稳定于碱性条件的样本。
4. 包被温度：
常见的包被温度包括室温（1825°C）、4°C（冷藏）和37°C（孵育箱）。室温适用于大多数抗原和抗体。
5. 包被浓度和时间：
1) 通过棋盘滴定法可以确定抗原的最佳包被浓度和时间，以获得最佳的信号强度和最小的背景。
2) 通常会进行包被浓度的梯度实验，选择能使标准曲线线性好且背景低的条件。
6. 封闭剂的选择：
1) 封闭剂可以减少非特异性结合，常用的封闭剂包括0.05%0.5%的BSA、10%的小牛血清或1%明胶、脱脂奶粉等。
2) 封闭剂的选择需要根据具体的实验需求和抗原特性来定。
7. 包被原的稳定性：
保持抗原的稳定性对于获得一致的实验结果至关重要。例如，重组蛋白在包被前应避免反复冻融，以免影响其结构和活性。
通过综合考虑上述因素，可以优化ELISA试剂盒的包被步骤，提高实验的准确性和重复性。
