ELISA（酶联免疫吸附测定）是一种常用的免疫学检测技术，用于定性和定量检测样本中的抗原或抗体。它结合了抗原抗体反应的特异性与酶催化作用的高效性，通过酶作用于底物后的显色反应来判定结果。ELISA实验主要涉及以下步骤：
1. 包被：将抗原或抗体固定在微孔板上。对于抗原检测，将抗原包被在微孔板上；对于抗体检测，则是将特定的抗原（通常是捕获抗体）包被。
2. 封闭：使用如BSA或明胶等非特异性蛋白封闭未结合的位点，减少非特异性结合。
3. 孵育：加入待测样本，让样本中的抗原或抗体与包被在微孔板上的抗原或抗体结合。对于夹心法，首先加入捕获抗体，然后加入待测样本，再加入检测抗体。
4. 洗涤：洗去未结合的物质，以减少背景信号。
5. 标记物孵育：加入酶标记的二抗（间接法）或直接加入酶标记的抗体（直接法）。
6. 洗涤：再次洗涤以去除未结合的酶标记物。
7. 显色：加入底物，通过酶的作用产生可检测的颜色变化。
8. 终止反应：加入终止液，停止酶促反应。
9. 读取结果：通过酶标仪在特定波长下读取吸光度（OD值），与标准曲线比较得出样本中目标分子的浓度。
ELISA实验有几种常见类型，包括直接ELISA、间接ELISA、夹心ELISA和竞争ELISA，每种方法适用于不同的检测需求和样本类型。直接ELISA步骤少，速度快但灵敏度低；间接ELISA使用二抗，灵敏度高但存在交叉反应风险；夹心ELISA特异性和灵敏度都很高，但对配对抗体要求严格；竞争ELISA适用于小分子抗原的检测，但灵敏度相对较低。
在进行ELISA实验时，需要注意样本的处理、试剂的配制、操作的规范性以及实验条件的控制，以确保实验结果的准确性和重复性。此外，进行预实验来确定最佳的样品稀释度和实验条件是非常重要的。
