免疫PCR（Immuno PCR, ImPCR）是一种结合了免疫学和聚合酶链式反应（PCR）技术的微量抗原检测方法。它利用了抗原抗体反应的特异性和PCR扩增的极高灵敏性，来提高检测的敏感度。
以下是关于免疫PCR的重难点汇总如下：
一、基本原理：
1. 免疫反应部分：类似于ELISA，首先使用待测抗原包被微滴板孔，然后加入特异抗体使其与抗原结合，形成抗原抗体复合物。
2. 连接DNA部分：通过生物素化抗体和链亲合素蛋白A嵌合体的连接，将生物素化DNA间接吸附于固相的抗原抗体复合物上。
3. PCR扩增：将吸附的生物素化DNA进行PCR扩增，最终的PCR产物量与抗原量成正比。
二、方法特点：
高灵敏度：免疫PCR的灵敏度远高于传统的ELISA和RIA，可以检测到pgfg级别的抗原。
广泛适用性：适用于各类蛋白的检测，包括肿瘤标志物、病毒蛋白、病原体、微生物和毒素等。
信号放大：通过PCR的指数放大作用，即使微量的抗原也能被检测到。
快速检测：由于PCR的快速扩增能力，可以快速获得结果。
多重检测支持：可以同时检测多个目标抗原。
三、实验步骤：
1. 生物素化DNA制备：使用生物素标记的M13引物对噬粒进行PCR扩增，得到含T3和T7引物序列的生物素化DNA。
2. 包被与封闭：用抗原包被微滴板，再用封闭液封闭未结合位点。
3. 抗原抗体反应：加入特异抗体，室温孵育后洗去未结合的抗体。
4. 链亲合素蛋白A结合：加入链亲合素蛋白A嵌合体，使其与生物素化抗体结合。
5. 生物素化DNA结合：加入生物素化DNA，使其与抗原抗体复合物结合。
6. PCR扩增：收集吸附有生物素化DNA的微滴板，进行PCR扩增。
四、优点与挑战:
优点：极高的灵敏度和特异性，适用于微量抗原检测。
挑战：抗体与寡核苷酸偶联难度大，成本较高，耗时较长，需要专业知识。
免疫PCR作为一种高度敏感的检测技术，虽然具有诸多优势，但其复杂性和成本限制了其在所有实验室中的广泛应用。
