蛋白浓度，通常指的是溶液中蛋白质的含量，具体来说是单位体积溶液中所含蛋白质的质量。蛋白浓度是生物化学和分子生物学研究中一个非常重要的参数，用于评估蛋白质的表达水平、纯化效果以及样品的稀释比例等。实验测定蛋白浓度时需注意以下关键细节，以确保结果的准确性：
一、标准曲线的制备
为了确保测定的准确性，每次实验都应重新制备标准曲线，且标准品的稀释应使用与样品相同的缓冲液，以保持测定条件的一致性。
标准曲线的线性关系（R²值）应尽可能接近0.99，若R²值较低（如0.98），可能表明操作不当或试剂问题，需检查试剂质量和操作步骤的准确性。
二、操作步骤的严格遵守
试剂的准备和存储：确保所有试剂在使用前充分混合且在推荐的温度下存储。试剂的新鲜度对实验结果有显著影响。
精确加样：使用移液器准确量取和添加不同体积的液体，避免气泡产生，以免影响测量结果。
三、样品制备与保存
1、防止蛋白质降解
样品需快速冷冻（液氮速冻）并储存于-80℃，避免长时间暴露于高温或非最佳温度环境。
操作全程建议在低温（如冰上）进行，必要时添加蛋白酶抑制剂。
2、裂解与杂质去除
选择适合样品类型的裂解缓冲液（如RIPA缓冲液），结合超声破碎或冻融循环提高提取效率。
通过透析或超滤去除盐、去污剂等干扰物，避免质谱分析时信号干扰。
四、样品处理
样品中若含有高浓度的干扰物质（如PEG），可能会影响Bradford法的测定结果。此时应使用空白对照（如不含蛋白的样品）进行校正，或改用其他方法（如BCA法）进行测定。
五、仪器选择
光谱光度计：选择能够精确读取至0.001吸光单位变化的仪器，并确保其能够覆盖所需的测试波长，特别是BCA法所需的562纳米。
六、数据处理
计算浓度：根据标准曲线和样品的稀释倍数计算样品蛋白浓度，并记得样本稀释倍数需要还原回去。
七、实验重复性
为了提高实验的重复性和结果的可靠性，建议每次测定至少重复三次，并取平均值作为最终结果。
测定蛋白浓度时，需综合考虑标准曲线的制备、操作步骤的遵守、反应条件的控制、样品制备与处理、仪器校准及实验重复性等多个方面。通过以上措施可显著提升蛋白浓度测定的准确性和可重复性。
