ELISA（酶联免疫吸附试验）是一种高灵敏度、高特异性的免疫检测方法，广泛应用于科研和临床诊断。实验的准确性不仅依赖于试剂和仪器的质量，样本保存是否得当也起着决定性作用。
ELISA实验中样本保存是确保检测结果准确性和可靠性的关键环节，其重要作用主要体现在以下几个方面：
一、维持样本生物活性：
样本保存不当会导致蛋白质降解或变性，直接影响ELISA检测的灵敏度与特异性。例如，血清样本在4℃下保存超过5天可能导致IgG聚合，增加试剂本底干扰；而反复冻融会破坏蛋白质结构，造成假阴性结果。
二、避免实验干扰因素：
1、溶血控制：溶血样本中的血红蛋白具有过氧化物酶活性，在以HRP为标记的ELISA中会催化底物显色，导致假阳性。
2、细菌污染：菌体内源性酶（如大肠杆菌β-半乳糖苷酶）可能干扰标记酶反应。
3、抗凝剂选择：肝素抗凝血浆可能增加OD值，EDTA或NaN3则会抑制HRP活性。
三、避免蛋白降解：
新鲜样本中目标蛋白的稳定性较高，但如果保存不当，如温度过高或保存时间过长，可能会导致蛋白降解，影响检测结果。例如，血清或血浆样本在室温下保存时间过长，其中的蛋白质可能会发生聚合，间接法ELISA中可能会增加非特异性显色，导致假阳性或假阴性结果。
四、防止蛋白聚集或变性：
蛋白在反复冻融过程中容易聚集或变性，这会影响其与抗体的结合能力，从而干扰ELISA检测。因此，应尽量避免反复冻融样本，尤其是在长期保存时，建议将样本分装并冷冻保存在-20°C或-80°C，以减少此类问题。
五、优化保存条件与时效性
1、短期保存：4℃下血清样本建议24-48小时内检测，超过1周需-20℃冻存。
2、长期保存：-70℃可保存6个月至5年，但需分装避免反复冻融。
3、特殊样本：如激素类需添加抑肽酶，细胞裂解液需含蛋白酶抑制剂。
六、确保可重复性：
正确的保存方法有助于保持样本的一致性，确保不同批次实验或不同实验员操作时结果的可重复性。这在临床诊断、药物研发等应用中尤为重要。
七、正确的样本保存建议：
1、短期保存（5天内）：置于2–8°C冷藏。
2、长期保存：应分装后置于-20°C或-80°C冷冻，避免反复冻融。
3、避免污染：使用无菌容器，防止细菌滋生。
4、分装保存：每次只解冻所需样本量，防止多次冻融造成的蛋白降解。
八、结论
样本保存不当会导致ELISA实验结果出现假阳性或假阴性，影响实验的可重复性和数据的可信度。因此，遵循规范的样本保存流程是保证实验质量的前提。
