ELISA（酶联免疫吸附试验）是一种高灵敏度、高特异性的蛋白检测技术，广泛应用于科研和临床诊断。其核心依赖于抗原-抗体的特异性结合，因此抗体的选择直接决定实验成败。错误的抗体可能导致信号弱、背景高或假阴性结果。根据检测模式不同，需选用适合的抗体类型，并注意一抗与二抗之间的兼容性。
抗体选择核心要素
选择ELISA用抗体应重点考虑以下三个维度：
1、目的蛋白：确认抗体针对的目标抗原名称准确无误，建议核对Gene ID以避免同源蛋白混淆。
2、反应种属：所选抗体必须明确标注能识别待测样本的物种（如人、小鼠、大鼠等），避免使用“广谱哺乳动物”等模糊描述。
3、场景：确认抗体经过对应实验方法验证（如WB、IHC、ELISA），特别是用于夹心ELISA时，需保证抗体识别的是天然构象而非变性线性表位。
此外，还需关注抗体是否为单克隆或多克隆：
单克隆抗体：特异性高，批次间一致性好，适用于定量分析；
多克隆抗体：识别多个表位，信号更强，适合低丰度蛋白检测，但可能存在交叉反应。
不同ELISA类型的抗体匹配策略
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ELISA类型 |
适用场景 |
抗体要求说明 |
推荐实践 |
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夹心法 |
大分子蛋白（如细胞因子） |
需一对配对抗体：一个作为包被抗体（捕获抗体），另一个为酶标检测抗体 |
使用已验证的配对抗体组合，或通过双抗夹心ELISA筛选自建配对 |
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竞争法 |
小分子物质（如激素、药物残留） |
样本中游离抗原与标记抗原竞争结合有限抗体，信号强度与目标物浓度呈反比 |
选用高亲和力单克隆抗体（KD达10⁻⁹ M级）提升灵敏度 |
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间接法 |
检测抗体（如血清中IgG/IgM） |
固相包被抗原，加入样本后用酶标二抗检测结合的一抗 |
确保二抗种属来源与一抗宿主匹配（如鼠源一抗→抗小鼠二抗） |
补充说明：配对抗体是指能同时结合同一抗原上不同表位的两个抗体。即使两个抗体识别不同表位，也可能因空间位阻无法共存，因此需实验验证是否可配对。
实用建议与注意事项
1、优先选择经验证的产品：购买试剂盒时，查看是否有SCI文献支持或厂家提供的应用数据（如WB、IF验证图）。
2、注意标签与保存条件：
若使用带标签蛋白（如His、HA、Myc）的重组抗原系统，可选用相应标签抗体进行检测；
酶标抗体（如HRP标记）应避免反复冻融，HRP标记物不宜长期存放于含叠氮钠的缓冲液中。
3、封闭与洗涤优化：根据目标蛋白特性选择合适的封闭剂（如BSA用于磷酸化/糖基化蛋白，血清用于组织样本），并严格执行洗涤步骤以降低背景。
建议
在正式实验前，建议进行标准曲线验证（R² > 0.99）、质控品检测（偏差 < 15%）及与其他方法（如Western Blot）的比对实验，确保新批次试剂盒性能稳定。对于关键项目，优先选择具有FDA 510(k)或CE IVD认证的试剂盒。
