PCR试剂盒含有酶、引物、dNTPs等对温度和环境敏感的成分，不当储存或过期可能导致活性下降或污染，进而影响检测结果的准确性。因此，在使用前系统评估其有效性至关重要，尤其在科研与疫病监测中。
判断方法：四步核查法
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检查维度 |
正常表现 |
异常表现（提示失效） |
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有效期 |
使用日期在标签标注的有效期内，且到货时距失效日大于规定天数（如270天） |
已过期或临近过期未及时使用 |
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储存条件 |
始终按要求保存（如-20℃冷冻、避光、避免反复冻融） |
曾长时间暴露于室温、反复冻融或包装破损受潮 |
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外观状态 |
试剂澄清、无沉淀、无霉变；冻干品完整 |
出现絮状物、分层、变色或结块 |
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功能验证 |
阳性对照有扩增（Ct值正常）、阴性对照无扩增（无条带或Ct=40） |
阳性对照无反应、阴性对照出现非特异条带或污染 |
功能验证是金标准
仅靠外观和日期无法完全确认性能，必须通过实验验证：
阳性对照失效：若已知阳性的样本或试剂盒自带阳性对照无扩增，说明试剂（尤其是酶或引物）可能失活 。
阴性对照污染：若空白样本（NTC）出现扩增条带或低Ct值，提示试剂或操作环境已被外源DNA污染，整批结果不可信。
灵敏度下降：弱阳性样本检测为阴性，可能是试剂活性降低所致。
注：部分用户经验显示，短期轻微过期且妥善冷冻保存的试剂仍可能有效，但存在风险，不建议用于关键实验。
下一步
PCR试剂盒是否失效，应优先以对照实验结果为准。使用前务必：
核对有效期与储存记录；
检查试剂物理状态；
每次实验都运行阳性和阴性对照，确保体系正常。
若对照异常，即使试剂未过期也应停止使用，并联系供应商处理。
