进行分子生物学实验时，能帮忙提升效率的重要工具是快速PCR扩增试剂盒。和传统PCR作比较，它凭借优化酶体系以及缓冲液成分，可以把扩增所需要长达两至三小时的时间，缩短为仅需三十至六十分钟。对于该技术，如果想要更好地加以利用，那么就需要理解其设计原理，以及所适配的场景。
快速PCR原理是什么
快速PCR的关键之处在于运用了改造后的DNA聚合酶，该酶具备更高的延伸速度以及热稳定性。与此同时，试剂盒里的缓冲液能够更高效地调控离子强度，促使引物与模板的结合得以加速。除此之外，快速循环程序缩短了变性、退火和延伸步骤的保温时间，但是始终确保扩增的特异性。
如何选择快速PCR扩增试剂盒
选择之际，需考量三个要素，其一为扩增片段长度，其二是模板复杂度，其三乃检测灵敏度，对于三百碱基对以下的短的片段，多数试剂盒皆可胜任，然而长片段或者高GC含量的模板，就需要去挑选专门经优化的产品，查看说明书当中的扩增曲线以及熔解曲线数据，能够判断其特异性的表现，优先去选择经过多物种验证的试剂盒，以此减少优化成本。
使用快速PCR试剂盒注意事项
模板质量会正对扩增成功率产生直接影响，快速PCR对于抑制剂更为敏感，所提取的DNA要保证不存在蛋白或者酚残留，退火温度的设定建议借助梯度PCR预先加以确定，相比理论值略微高出2至3℃能够减少非特异性条带，循环数不适合超过35个，不然容易出现拖尾或者弥散现象，每次实验都要设置阳性对照以及阴性对照，以此便于能够快速排查问题。
快速PCR与普通PCR区别
主要差异存在于时间效率以及酶活性方面。普通PCR运用Taq酶，其延伸速度大概是1kb/min；快速PCR采用突变型聚合酶，速度能够达到2 - 4kb/min ，并且不需要热启动步骤。快速试剂盒的循环程序总体时长一般处于45分钟以内，然而普通程序则需要2小时以上。不过，针对极低拷贝数或者具有复杂二级结构的模板，普通PCR的稳定性或许会更优良。
