实验室用于定量检测特定蛋白的常用工具之中，抗体ELISA试剂盒占据一席之地，该试剂盒在基础研究以及生物制品质量控制等方面有着广泛应用。当选择与使用的方式恰当之时，能够获取稳定且可靠的数据；与之相反的情况之下，则有可能造成样本以及时间的浪费。接下来，从几个实际操作的角度出发，讲述一番我的经验。
抗体ELISA试剂盒怎么选
首要之事是去确认检测样本的种属以及目标抗原的适用性，不同的试剂盒针对于人、小鼠、大鼠等这些种属的抗体识别位点是不一样的，要是买错种属就会致使无信号或者出现交叉反应，要查看说明书里的交叉反应列表，以此确认待测样本当中不存在干扰物质，其次要比较灵敏度和检测范围，灵敏度过低的话可能会漏检低浓度样本，范围太窄的情形下则需要进行反复稀释，建议依据文献所报道的样本预估浓度，进而选择检测区间能够覆盖该数值的试剂盒。
抗体ELISA试剂盒操作有哪些关键细节
新手最易出错的环节是稀释倍数，标准品与样本得依照试剂盒推荐倍数去稀释，与此同时要做好预实验来摸索最佳稀释度，加样时枪头不可触碰孔底，以免刮伤包被抗体，洗板次数以及浸泡时间需严格统一，洗板过多会使信号降低，过少则背景升高每孔加液体积建议运用多道移液器，误差控制在2%以内，另外封板膜必须压紧，防止边缘孔因蒸发产生边缘效应。
如何判断试剂盒检测结果是否可靠
相关系数R²对于标准曲线而言，应当大于0.99，并且各浓度点实测的OD值呈现出S型分布。要是标准品最高浓度点的OD值低于1.0，那么有可能是抗体失活，又或者是底物变质。样本复孔之间的CV值理应小于10%，一旦超出就表明加样或者孵育不均匀。同时要设置空白对照、阴性对照以及阳性对照，空白孔OD值高于0.1意味着洗板不彻底。回收率实验同样是验证准确度的常用办法，在样本当中加入已知浓度标准品，计算得出的回收率处于80%-120%之间才算是合格。
抗体ELISA试剂盒保存与使用注意事项
试剂盒到货之后，要马上核对其中组分，按照说明书给出的要求进行存放，未曾开封的试剂一般在2-8℃之间进行保存。已然稀释的标准品以及检测抗体，建议分开包装之后冻存于-20℃，防止出现反复冻融的情况。使用之前要把所有试剂平衡到室温，不过显色液以及终止液需要避免光照进行保存。浓缩洗涤液要是有结晶，需要在37℃的水浴之中溶解之后再进行混匀。每一次实验都要记录批号以及有效期，不同批次的试剂盒是不可以混合使用的。开封之后的酶标板条要用铝箔袋密封起来，并放入干燥剂，最好在1个月之内用完。
