用于实验室开展蛋白定量的ELISA检测试剂盒，以及用于免疫分析的该试剂盒，是常用工具，其原理依据抗原抗体特异性结合，还基于酶催化显色反应。挑选适合的试剂盒，而且规范进行操作，这是获取准确数据的核心前提条件。下面从三个角度展开，一个角度是挑选，一个角度是操作，还有一个角度是常见问题。
如何挑选合适的ELISA检测试剂盒
首先，要明确检测的样本是哪种类型，明确目标蛋白的种属来源是怎样的。不同的试剂盒，对于血清、细胞上清、组织匀浆的适用性，是存在差异的，在购买之前，应当仔细核对产品说明书里的样本验证数据。同时，要关注试剂盒的检测范围，关注其灵敏度，确保它能够覆盖你样本中待测物的预期浓度区间，避免因为量程不匹配，而导致结果失真。
其次，要去考察试剂盒的特异性以及重复性，去查看产品技术参数当中的交叉反应率，还有批内批间变异系数，交叉反应率过高的话，就有可能会产出假阳性，那变异系数要是超过了10%的话，就表明稳定性不太好。建议去选择经过第三方验证的或有文献引用的品牌，并且优先考虑即用型试剂盒，以此来减少手工配制误差。
ELISA实验操作时需要注意什么
关键的第一步是样本制备与保存，血清样本要防止溶血以及反复冻融；细胞上清得去除颗粒物；组织匀浆要把控匀浆温度以避免蛋白降解。要把所有样本分装冻存，每次取用时只用单管，且加样之前必须充分离心并平衡到室温，不然低温样本会使抗原抗体结合速率变慢。
洗板以及拍板，直接对背景噪音高低起着决定性作用，洗板的时候，要保证洗液把各个孔都注满，不过浸泡的时间不适合超过30秒，这是为了防止结合力比较弱的抗原被洗脱，使用多道移液器的时候要垂直加液，以此来避免刮伤板底，每一次洗板之后，应该在吸水纸上用力把残留的液体拍干，然而要留意别让板孔直接和纸面接触从而造成污染。
标准曲线结果异常如何排查
当标准曲线斜率呈现偏低状况，或者R值未能达到标准要求的时候，应当优先展开对于标准品稀释步骤的检查工作。标准品在进行复溶操作之后，需要做到充分地混匀，不过要注意避免产生气泡，在进行梯度稀释操作时，这必须更换枪头，不然的话，就会因为存在残留的缘故，进而导致曲线出现非线性的情况。与此同时，要确认孵育温度是不是恒定处于37℃，因为温度出现波动的话，将会对酶促反应速率产生影响。
通常来讲，高背景或者显色过深这种情况，往往是同洗涤不充分或者底物遭到曝光存在关联的。得细心查看洗板机管道是不是堵塞了，而且手洗的时候，每一个孔的注液量必须要保持一致才行。底物液需要在避光的条件下进行保存，并且时刻留意颜色的变化情况，要是在加入终止液之前孔内已经明显地变蓝了，那就表明孵育的时间过长了，或者是试剂盒已经失去效用了，这种情况下就应当重新开展实验。
念完这篇指南之后，你于ELISA检测试剂盒的实际运用当中，还碰到过哪些让人头疼的状况呢？欢迎在评论区域分享你的经历以及解决办法。
