用来提升效率的重要工具也就是快速PCR扩增试剂盒，它存在於分子生物学实验里，它借助對酶体系以及缓冲液成分加以优化，从而明显地缩短扩增所需时间，与此同时还能确保产物特异性以及产量，对于那些每日都要处理大批量样本的实验室来讲，去挑选契合的快速试剂盒，通常能够直接提高整体工作流的速度。
快速PCR扩增试剂盒怎么选
首先得看扩增的速度，不同品牌的快速试剂盒所标称的时间，从30分钟至60分钟是各有不同的，而其实际展现，与模板的类型、涉及引物的设计紧密关联，建议去对比扩增的曲线以及Ct值，优先挑选经过多种样本验证的产品。其次是热启动酶的激活方式，抗体封闭型相较于化学修饰型其升温速度更快，适合那些追求极致速度的场景。另外，试剂盒有没有提供预混好的Master Mix、能不能兼容常规PCR仪，同样是影响使用便利性的关键因素。
扩增效率和特异性哪个更重要
两者之中缺少任何一个都不行，然而在快速体系里特异性常常更有挑战性。因为使得延伸时间大幅度被压缩，所以非特异性条带的风险会有所上升。优质的快速PCR扩增试剂盒凭借添加特异性增强因子，能够在退火温度选择范围较广的状况下依旧维持干净的背景。建议运用梯度PCR去测试不同退火温度下的扩增结果，留意观察目标条带亮度以及杂带出现的情形。要是试剂盒本身带有染料，那么还能够直接开展电泳，从而省去额外加样的步骤。
如何验证试剂盒的重复稳定性
批次之间的一致性，乃是实验室能够长期使用的保障所在。当拿到新的批次之后，需运用标准品去开展三次独立的实验，以此来计算 Ct 值的标准差以及变异系数。性能良好的快速 PCR 扩增试剂盒，其 CV 值一般是低于 5%的。与此同时，还能够对不同保存条件之下的性能进行测试，就像反复冻融 5 次之后，是否依旧能够保持同等的扩增效率。部分厂家会提供质控报告，建议将其保留下来并且定期进行比对。要是条件许可的话，与之前经常使用的普通试剂盒进行平行比较，这样能够更加直观地看出速度提升的同时，是否伴随着其他参数产生变化。
不同类型样本该用哪种方案
基因组DNA、cDNA、质粒DNA，它们针对快速扩增，耐受度是不一样的。若是纯度较高的质粒，或者短片段扩增，那么能够采用更极端的短时间程序。然而复杂模板，像基因组DNA，或者带有高GC含量的序列，就需要去选择专门优化过的快速试剂盒。有些产品提供针对血液、植物或者土壤样本的专用缓冲液，这种缓冲液可以直接加入粗提物，而不需要进行纯化。建议依据实验室主要样本类型，向供应商索要试用装来进行预实验，从而找到最适合的那一款。
