在免疫检测实验里头，核心的试剂是一抗咧，它具备的质量会直接去决定实验结果呈现出来的准确性。不管是开展Western blot实验，又或者是进行ELISA实验，甚至是做免疫组化实验，挑选到合适无误的一抗可是整个流程的第一步。接下来依据实际积累的经验，来分享一些有关一抗使用方面的关键要点。
一抗怎么选
最开始要去确认一抗的种属来源，以及它的反应性，比如说检测小鼠来源的蛋白时，一抗一般需要挑选兔抗或者鼠抗，同时还要看清说明书上所标注的物种反应性，其次要留意一抗的克隆类型，单克隆抗体特异性很强，不过可能识别单个表位，多克隆抗体灵敏度高，然而可能存在交叉反应，最后查看文献引用次数，高引用的一抗通常更为可靠。
一抗如何保存
接过那一抗，马上依据说明书予以分装保存，多数一抗若要长期维持保存状态，就得放置于零下二十摄氏度之处，规避反复冻融的情况，分装之时运用低吸附管依一次实验的用场数量来进行分装，工作液提议当下配制供当下使用，在四摄氏度的短暂存放时段不得超过一周，留意避开光线进行保存，特别是带有荧光标记的那一抗，与此同时记录好批号以及有效期，过期的或者保存方式不当的一抗灵敏度会显著下降。
一抗工作浓度
需要凭借预实验去摸索出最佳浓度，先参照说明书所推荐的稀释比例，像1比1000直至1比5000这样，接着设置若干梯度去进行稀释测试，浓度要是过高就会出现非特异性条带或者产生背景过深的情况，浓度要是过低那么信号就会太微弱甚至是毫无信号，通常建议先利用阳性对照样品来确定最低有效浓度，之后在正式实验当中使用该浓度的1.2倍到1.5倍，每次更换新的一批次一抗都得重新去优化浓度。
一抗孵育条件
孵育的时间以及温度会对地对结合效率产生影响，大凡在4℃的条件下开展缓慢的震荡孵育并持续至过夜，如此这般方可获取最为特异的成果，此种情形适宜于对低丰度蛋白予以检测，于室温环境下进行1至2小时的孵育，这对于快速检测高丰度蛋白而言是适配的，在孵育之际务必要确保一抗工作液能够将膜或者切片完全覆盖住，防止出现干片的状况，与此同时还要设置阴性对照，就像采用同型IgG去替换一抗这般，凭借此来评估背景信号的渊源。
