通过基因工程方式,在宿主细胞里表达生产出来的抗体分子,是重组抗体,它将传统抗体制备的局限性全然改变。和杂交瘤技术相较,重组抗体有着序列清晰明确、批次稳定、能够规模化生产等显著特点,正逐渐成为生命科学研究以及生物技术领域的核心工具。
重组抗体有什么优势
最大优势在于批次间一致性的是重组抗体,传统腹水制备的抗体每批次都有可能存在着差异,而重组抗体是通过稳定转染的细胞株来进行生产的,其基因序列以及翻译后修饰高度可控,这种一致性对于需要长期追踪实验数据的科研工作而言至关重要,能够大幅降低重复实验的变量干扰。
能进行灵活工程化改造的是重组抗体,研究人员可依据需求,对抗体开展人源化、促使亲和力成熟或者引入特定标签的操作,甚至还能构建双特异性抗体亦或是小型化抗体片段,这种可塑性让重组抗体能够适配多种检测平台,像免疫沉淀、通过流式细胞术以及生物传感芯片,显著地扩展了应用场景。
重组抗体如何生产
生产重组抗体时,第一步是要获取抗体可变区基因序列,一般是从杂交瘤细胞或者免疫动物B细胞当中扩增出轻重链基因,也能够通过噬菌体展示库直接进行筛选,这些基因片段在经过测序验证以后,便被克隆到契合哺乳动物、大肠杆菌或者酵母的表达载体里。
表达系统的挑选直接对产量以及修饰模式产生影响,CHO细胞是最为常用的哺乳动物表达宿主没错,它能够达成正确的糖基化修饰,所分泌的抗体活性近乎天然分子。历经转染与加压筛选这一过程,获取高表达单克隆细胞株,接着通过无血清悬浮培养以及蛋白A亲和层析纯化的操作,便能够得到纯度高的从毫克级别到克级别的重组抗体。
重组抗体应用在哪些领域
在科研检测这一领域当中,重组抗体被用作为一抗,用于诸如Western blot、免疫组化以及ELISA等实验。由于批号与批号之间的差异极其微小,所以不同时间购买的抗体能够进行混用,并不需要重新去验证稀释比例,这就给大型队列研究以及多中心合作项目提供了可靠的保障。许多试剂供应商已经把核心产品逐渐替换成了重组形式。
生物分离环节越来越多地采用重组抗体,质控环节同样有此情况。比如说,在亲和层析介质里偶联重组蛋白A或者蛋白G,以此用于单克隆抗体的捕获纯化。而在环境监测当中,重组抗体被制作成快速检测试纸条,用来识别农药残留。在食品安全检测里,重组抗体被制成快速检测试纸条,用于识别致病菌抗原,其灵敏度高,并且批间重复性良好。