如何制备单克隆抗体
单克隆抗体的制备依靠经典的杂交瘤技术,先是把特定抗原注射进小鼠体内,以此刺激B淋巴细胞产生免疫应答,数周之后取出小鼠脾脏,从中分离出能够分泌抗体的B细胞,接着再让其与骨髓瘤细胞在聚乙二醇作用下作融合,那些融合后的细胞要经过HAT培养基筛选,唯有成功杂交的细胞才可以存活。
由筛出的杂交瘤细胞利用有限稀释法来实行克隆化培养,要保证每个培养孔当中只有一个细胞。那么随后使用ELISA方法去检测各孔上清液,进而找出能够分泌目标抗体的阳性克隆。而把这些克隆予以扩大培养,这样便能够从培养上清或者小鼠腹水中大量获取高纯度的单克隆抗体。
单抗和多抗区别
只识别抗原上一个特定表位的单克隆抗体,特异性极强,批间差异小,适合用作标准化检测试剂,由多个B细胞克隆产生的多克隆抗体,能识别同一抗原上多个表位,灵敏度更高,却容易发生交叉反应,不同批次间一致性较差。
在具体的应用情形当中,是要依据实验的目的来进行选择的。要是要求能够精确地识别特定的分子结构,比如说去区分蛋白质的磷酸化以及非磷酸化的状态,那么单抗就是首先会被选用的。要是检测的是样品里含量极低的靶标,并且需要具备更强的信号放大能力,如此一来多抗就会更为适宜。这两种抗体各自都有着优势之处,彼此之间是相互补充的。
单抗用于哪些检测
在食品安全检测里,单克隆抗体起着关键作用,比如说检测牛奶中的黄曲霉毒素M1时,借助包被了单抗的酶标板来捕获毒素分子,依靠显色反应判断有无超标,同样地,肉类产品里的瘦肉精、水产品中的氯霉素残留呢,也都要依赖单抗所建立的免疫分析方法来进行快速筛查。
单抗在环境监测领域也是不可或缺的,检测水样里的除草剂残留、类似莠去津这样的农药成分,或者土壤中的多氯联苯污染物,都能够借助单抗制作成便携式检测试纸条,另外,于生物制品生产当中,单抗还用于检测宿主细胞蛋白残留,以此保证最终产品的纯度契合标准。