用于流式细胞术实验的核心试剂是流式抗体，其质量以及使用手段会直接对数据结果的精确性产生影响。针对从事细胞免疫分析、表面标志物检测等研究工作的实验人员而言，对流式抗体的特性予以理解，并且掌握正确的操作方法，乃是获取可靠数据的根基。下面自几个常见问题着手，分享一些实用的经验。
流式抗体怎么选克隆号
同一抗原的不同表位，由不同克隆号识别，其结合亲和力跟特异性存有差异，在选购之际，需优先去查阅已发表文献里针对相同样本种属以及组织类型所使用过的克隆号，对于新靶点而言，则能够向供应商索要小样来开展预实验，借助对比阳性率与背景信号去挑选最为合适的克隆。
流式抗体滴定如何操作
滴定属于用以确定抗体最佳工作浓度的必要步骤所在，要去取阳性对照细胞，把抗体依照推荐起始浓度展开梯度稀释，像1:50、1:100、1:200、1:400等这般，分别进行染色之后上机予以检测，计算每个浓度之下的染色指数，也就是Stain Index，挑选出染色指数处于最高状态且背景荧光处于最低状态的浓度当作后续实验的工作浓度。
多色配色需要注意什么
展开多色实验之时，需要将荧光染料的光谱重叠纳入考量范围。应当优先去挑选那种亮度较高，并且和其他通道重叠程度较小的染料，来对低表达抗原实施标记。与此同时，要对串联染料（像是那PE-Cy7）的稳定性予以留意，防止出现反复冻融以及长时间固定的情况。建议运用荧光补偿微球单染管，于每次开展实验之前构建起精确无误的补偿矩阵。
流式抗体保存与使用规范
抗体要进行分装，之后需在避光的情况下，保存于二至八摄氏度，除特别做出注明的情况之外，严禁进行冷冻。在使用之前，要充分地进行混匀，不过要避免产生气泡。打开盖子之后，要尽量减少暴露在室温环境的时间，以此来防止微生物出现污染以及效价有所下降。每一次的实验，都要设立同型对照以及单染对照，目的是用于区分非特异性结合跟背景荧光。
