直接从山羊组织分离获取的初始细胞群体即为山羊原代细胞，它最大程度地保留了体内细胞的生物学特性，在畜牧科研以及生物制品研发方面有着重要价值。而掌握其提取与培养的核心技术，乃是保证后续实验成功的关键所在。
提取步骤有哪些
采集组织后，要在无菌状况下迅速除掉血管以及结缔组织，剪成大概1立方毫米的小块。采用胰蛋白酶与胶原酶联合消化的方法，在37摄氏度的水浴里震荡消化30至60分钟，在这期间每隔10分钟观察细胞脱落的情形。消化完毕后加入血清终止反应，经过100目以及200目细胞筛过滤，去除没有消化的组织碎片。通过离心收集细胞沉淀，用磷酸缓冲液清洗两遍，最终用完全培养基重新悬浮。
培养条件怎么调
对于山羊原代细胞而言，其对培养环境抱持着较为敏感的特性，基础培养基方面推荐选用DMEM/F12，需添加体积分数为百分之10的胎牛血清以及1%的双抗。培养箱的参数设定为温度37摄氏度、二氧化碳浓度百分之5、相对湿度处于饱和状态。该细胞贴壁速度较为缓慢，在接种之后的48小时之内要尽量避免去移动培养瓶。首次进行换液，时间建议设定在72小时，目的是去除那些未贴壁的死亡细胞，后续每隔2到3天便要换液一次。
常见污染如何防
细菌污染呈现出培养基很快变黄、变得浑浊的状况，在镜下能够看见大量游动的颗粒。真菌污染于培养液表面构建起白色絮状的物质，在显微镜下面能够见到菌丝的结构。支原体污染具备很强的隐蔽性，会致使细胞生长得缓慢、形态出现异常，建议每个月运用支原体检测试剂盒进行一次排查。所有的操作都必须在二级生物安全柜之内开展，器械以及试剂需要专用，每次使用完毕后进行 30 分钟的紫外照射。可以在培养基之中添加抗真菌剂比如两性霉素 B，不过需要留意浓度过高会对细胞活性产生影响。
传代时机怎么判断
就在细胞融合度达百分之80至90之际便可开展传代操作。山羊原代细胞的消化存在较大难度，先是运用磷酸缓冲液洗涤两次，接着加入0.25%胰蛋白酶 - EDTA去覆盖细胞层，于37度的环境下消化2到5分钟。在镜下观察到细胞呈现变圆、间隙增大的状况时，即刻加入含有血清的培养基来终止消化。按照1比2或者1比3的比例接种至新的培养瓶当中，传代之后的前24小时要防止出现晃动情况。要是细胞超过10代却依旧没有老化，那就需要警惕极有可能发生了恶性转化。
