在免疫检测技术里，酶标记抗体属于核心工具，它把酶具备的高效催化能力，跟抗体拥有的高特异性识别特性，巧妙地结合起来，凭借化学交联方式或者基因工程方法，让抗体携带上酶分子，在酶标抗体同目标抗原相结合后，加入对应的底物就能够产生可检测的信号，比如颜色或者化学发光，借此达成痕量物质的定性或者定量分析。
酶标记原理
包含戊二醛法、过碘酸盐法以及基因融合法的常用酶标记方法中，戊二醛身兼双功能交联剂，可同时跟抗体以及酶分子之上的氨基起反应进而形成共价键，这种操作虽简单然而有可能对活性位点造成影响。过碘酸盐法是先将辣根过氧化物酶表面的糖基予以氧化从而产生醛基，接着与抗体氨基相结合，其标记效率更高并且对酶活性的保护较为良好。
基因重组技术把酶基因跟抗体基因片段融合起来进行表达，从而生产出均一的融合蛋白。这种办法避免了化学交联的随机性，标记产物有着确定的化学计量比以及空间构型。不管采用哪一种原理，关键之处在于维持酶催化活性与抗体结合活性之间的平衡，要保障标记后的复合物在检测体系里保持双重功能。
制备酶标抗体
严格把控几个关键步骤，才能制备高质量酶标抗体。首先要选择高纯度的抗体和酶，推荐选用亲和纯化的单克隆抗体和高比活性的酶制剂。标记之前，需对抗体进行缓冲液置换，常用pH 9.6的碳酸盐缓冲液或者pH 7.2的磷酸盐缓冲液，致力于提供适宜的反应环境。
就拿过碘酸盐法标记HRP来说，先取出4mg的HRP，将其溶解于1ml蒸馏水中，接着加入0.4ml刚配好的0.1M过碘酸钠，在室温环境下，于避光状态下搅拌20分钟。之后通过透析或者脱盐的方式，把过量的氧化剂去除掉，紧接着马上与抗体进行混合，随后在pH 9.5的条件下反应2小时。最后加入硼氢化钠进行还原，经过凝胶过滤纯化后得到酶标抗体。整个这个过程都需要在低温的状态下进行操作，要避免出现剧烈振荡的情况。
酶标抗体保存
酶标抗体做好标记后，对温度极为敏感，对pH敏感性也高，对微生物污染同样敏感。常见的保存办法是什么呢，是分装之后放到低温环境冻存，温度为零下二十摄氏度，或者为零下八十摄氏度，加入和样本等体积的甘油，这样做能够防止反复冻融致使活性下降。要是短期使用，使用期限是一到两周，那可以将其存放于四摄氏度的环境，但此时需要添加百分之零点零二的叠氮钠当作防腐剂，值得注意的是，叠氮钠会抑制HRP的活性，所以在使用之前需要通过透析把它去除。
为了让保存期得以延长，能够加入稳定剂，像是1%的BSA、0.1%的明胶或者商业化的蛋白保护剂也行。要避免去使用含有巯基的防腐剂，像硫柳汞这种，因为它们会把酶的二硫键给破坏掉。每一次取用的时候需要用无菌枪头以及冻存管，以此来防止污染。要定期对标记物的效价进行检测，通常合格的产品在-20℃的情况下能够稳定保存1至2年，建议每半年对工作浓度进行一次复核。
