常用工具通用型 PCR 试剂盒存在于分子生物学实验室，它可适配多种模板类型以及引物对，助力研究人员迅速完成基因扩增实验，这类试剂盒一般预混包括聚合酶、缓冲液、dNTP 等的核心组分，其操作简便并且结果稳定，在实际使用当中，每个实验人员都需要掌握根据实验需求选择适宜产品、优化反应体系这样一个基本技能。
如何选择通用型PCR试剂盒
针对于市场里不同牌子的通用型PCR试剂盒，首要需留意其扩增效率以及特异性，查看产品说明书之中的酶活性以及保真度参数，高保真酶适宜克隆实验，然而普通Taq酶更适配于基因分型，与此同时确认试剂盒是不是兼容你的PCR仪型号以及常用的引物设计，挑选经过验证的产品能够削减非特异性条带，防止重复优化时间。
通用型PCR试剂盒引物设计要点
扩增效果受引物设计的直接影响，这对于通用型PCR试剂盒而言。引物长度建议处于18至25个碱基的范围，GC含量要在40%到60%之间进行控制，还要避免有连续重复序列。尤其要注意的是，引物自身不能形成发夹结构或者二聚体，退火温度要尽量相近。对于通用型试剂盒来说，引物终浓度一般是0.1至0.5μM，过高会引发非特异性扩增，过低会致使产量不足。
通用型PCR试剂盒反应条件优化
假使运用通用型PCR试剂盒，那也得针对不同的模板去使退火温度以及循环参数得以优化。而初次进行实验时，建议设置退火温度梯度，也就是从Tm - 5℃到Tm + 5℃，进而去观察在哪一个温度的情形下条带是最为清晰的。延伸时间是依据目标片段的长度来设定的，一般情况下每 1kb 就设置 30 - 60 秒。循环数处于 28 - 35 圈就已然足够了，倘若过多的话就会致使出现非特异性背景。模板的加入量要控制在 10 - 100ng 之间，若是过量的话就会抑制反应。
通用型PCR试剂盒常见问题处理
碰到扩增失败或者杂带过多的状况时，最先去检查模板质量以及引物设计。通用型PCR试剂盒一般包含防污染组分，不过依旧要设置阳性对照与阴性对照。对于非特异性条带，可试着提高退火温度或者减少循环数。要是条带亮度不够，适度增加模板量或者延长延伸时间。记录每次的实验具体条件，以便后续能够快速排查问题。掌握这些技巧之后，你的PCR实验会更为顺利。
