从大鼠诸如肝、肾、神经等组织直接分离后马上进行培养的细胞称作大鼠原代细胞,其最大程度地保留了体内细胞的生理特性。和传代细胞系相比较而言,原代细胞更能够反映真实的生物学过程,因此广泛应用于药物筛选、毒理学以及机制研究。而掌握它的分离、培养与鉴定技术是实验成功的关键之处。
如何分离大鼠原代细胞
要分离大鼠原代细胞,就得遵循无菌操作原则,就拿肝细胞来说,先要把大鼠麻醉,接着对肝脏进行灌注,再用胶原酶去消化组织,经过筛网过滤之后通过离心来收集细胞,要留意控制酶的浓度以及作用时间,防止过度消化对细胞造成损伤,分离之后要马上用完全培养基进行重悬,用台盼蓝染色来检测活率,活率超过85%才能够用于后续实验。
大鼠原代细胞培养技巧
使用专用培养基来进行原代细胞培养,常常添加10%胎牛血清和生长因子。用胶原或者多聚赖氨酸包被培养器皿,以此促进贴壁。细胞接种密度需要适中,过于稀疏会影响细胞间通讯,过于密集则容易有接触抑制。在接种后4到6小时进行首次换液,把未贴壁细胞去除。在培养过程中每天观察形态变化,防止pH波动过大。
大鼠原代细胞鉴定方法
认定大鼠原代细胞的纯度与其身份,这是极其关键重要的。形态学方面的观察,乃是最为直接的办法,就像肝细胞呈现为多边形,神经元具备突起。通过免疫荧光染色去检测细胞的特异性标志物,像白蛋白应用于肝细胞,GFAP应用于星形胶质细胞。由流式细胞术能够对阳性细胞比例开展定量分析。除此以外,检测特定基因的表达,借助PCR,或者检测功能活性,比如摄取低密度脂蛋白,能够进一步进行验证。
大鼠原代细胞常见应用
在基础与转化研究里,大鼠原代细胞有着广泛应用,在毒理学评估当中,借助肝细胞检测化合物代谢产物还有细胞毒性,在神经科学领域,原代神经元被用来构建突触可塑性以及神经退行性疾病模型,除此之外,药物筛选、内分泌干扰物测试以及再生医学研究都依靠原代细胞给出更贴近生理状态的数据,正确运用原代细胞能明显提高实验可靠性。