COLO668培养条件
人小细胞肺癌细胞 COLO668 常见采用悬浮培养的方式,建议运用 RPMI - 1640 培养基,添加 10%的胎牛血清以及 1%的双抗。培养的环境要维持在 37 摄氏度、5%二氧化碳浓度的恒温恒湿培养箱当中。该细胞对营养消耗较快,一般每 2 到 3 天就需要补充新鲜的培养基或者进行传代操作。初始接种密度建议把控在每毫升 3×10^5 个细胞左右,如此能够保证细胞状态稳定且对数生长期明显。
COLO668形态特征
把COLO668细胞放在倒置显微镜下去加以观察,它呈现出典型的圆形或者卵圆形。它大多呈现为单个细胞或者小团块的状态悬浮着生长,其边缘之处滑溜且清晰。细胞的大小比较地均一,折光性很强,活力高的那些细胞内部颗粒感并不显著。当细胞的密度过高的时候,容易形成较大的细胞聚集体,就在这个时候中心区域的细胞有可能出现营养供应不足进而活力降低。定期去记录细胞形态的变化,对判断培养体系是不是正常有帮助。
COLO668传代方法
将培养瓶底部以及侧壁予以轻轻吹打,以此让贴壁不牢固的细胞达成完全脱落,接着把细胞悬液收集至离心管,以每分钟1000转的转速进行3至5分钟的离心,随后把上清液弃去,再加入新鲜培养基来重悬细胞。传代比例一般是1:2至1:3,可以依据细胞生长速度予以灵活调节。要留意吹打动作需轻柔,防止产生过多气泡从而对细胞膜造成损伤。传代之后的24小时里避免移动培养瓶,好让细胞恢复稳定生长。
COLO668冻存要点
存储COLO668细胞之际,选用含有10%二甲基亚砜以及90%胎牛血清的冻存液,依照每管1×10^6至2×10^6个细胞的密度来进行分装。首先把冻存管放置于4摄氏度去平衡30分钟,接着转移至-20摄氏度存放1小时,最终转入-80摄氏度冰箱度过一夜,次日能够转移到液氮罐里进行长期保存。复苏的时候迅速从液氮中取出来,在37摄氏度水浴里持续摇动让其在1分钟内实现融化,随后马上稀释到预先温热的完全培养基当中。