酶联免疫吸附测定身为生命科学范畴里极为常用的检测技术当中的一种，依靠自身具备的高灵敏度以及特异性，于食品质量把控、环境污染物筛选以及基础科研里面发挥着无法被替代的功用。而对它核心原理以及规范操作予以掌握，系获取可靠数据这事的前提条件了。
ELISA原理是什么
ELISA的全称为酶联免疫吸附测定，它巧妙地利用了抗原跟抗体之间特异性的结合反应，通过在固相载体上包被捕获分子，接着加入待测样品，在目标物被结合之后，使用连接了酶的二抗进行识别，最后加入底物显色，颜色的深浅跟目标物的含量成正比例关系，借此实现定量分析。
ELISA操作步骤详解
通常情况下，标准 ELISA 流程涵盖包被，紧接着是封闭，再之后进行加样，随后开展孵育，随之进行洗涤，随即加入酶标二抗，接着再次进行孵育与洗涤，然后加入底物显色，最后便是终止读数。每一个步骤当中的孵育时间以及温度都必须要严格予以控制，洗涤的次数以及浸泡的时间同样会直接对背景信号的高低产生影响。建议运用多通道移液器以此来减少孔间差异。
ELISA常见问题及解决办法
洗涤不充分，或者封闭试剂选择不当，常常会致使背景过高，这是极为常见的困扰，对此可增加洗涤次数，或者更换封闭液。样品出现降解，或者孵育时间不足，有可能造成信号过低，如此便需要重新配制标准品，并且延长反应时间。标准曲线线性不佳时，得去检查梯度稀释是否精准，还要查看酶标仪读数波长是否正确。
ELISA结果如何分析
获取吸光度值之后，要把标准品浓度当作横坐标，将OD值作为纵坐标，进而拟合出四参数或者线性回归方程。把待测样品的OD值代入方程当中，就能够计算出实际浓度。留意每个样品最好做复孔，去取平均值并且计算变异系数，CV值超过15%的数据建议舍弃重新做。
于你运用ELISA期间，所碰到的最为棘手的那种非特异性结合方面的问题，是借助怎样的方式去解决的呢？
