在生命科学研究里，常用的手段之中有免疫组化技术，然而结果的可靠性是由抗体质量直接决定的。选择合适的免疫组化抗体，需要考虑多个技术参数。以下结合实践经验，分享几个关键环节。
如何挑选合适的免疫组化抗体
优先去查阅经过验证的、已发表文献里头的抗体，要关注那个克隆号以及应用种属。同一靶标之下可能存在几十种抗体，得确认一下它能不能识别你样本里特定的抗原表位。单克隆抗体具有特异性强的特点，背景干净；多克隆抗体信号强度高，不过可能会存在交叉反应。按照实验目的去权衡选择，防止盲目地追求品牌。
免疫组化抗体浓度如何优化
抗体工作浓度不是说明书推荐值就能够通用的，得通过梯度实验自己去摸索。建议从说明书建议浓度向上、向下各取2 - 3个梯度，结合组织类型以及固定条件来进行调整。浓度要是过高就会致使非特异性着色，过低的话信号就会微弱甚至出现假阴性。每次更换新批次抗体的时候都应该重新滴定，以此确保批间一致性。
免疫组化实验背景高怎么办
抗体与非靶蛋白的非特异性结合致使背景染色出现多数情况。血清浓度可尝试在封闭液里予以增加，封闭时间能延长至1小时。适量吐温 - 20能减吸附，在稀释抗体的时候加之。另外，二抗充分吸附情况要检查，与一抗种属匹配度更高的二抗可以更换。必要之时，粗提抗血清能被亲和纯化的抗体替代使用。
免疫组化抗体的保存与使用要点
收到抗体后，马上将其分装成单次使用量，防止因反复冻融致使效价降低。长期保存要放在-20℃，短期在4℃存放不可超过一周。稀释液建议选用含载体蛋白的专用抗体稀释液，普通PBS容易造成抗体聚集。操作全过程要保持样本湿润，避免边缘干燥产生非特异性染色。每次实验一定要设立阳性和阴性对照，以此来判断抗体性能是否正常。
