WT97人常染色体多囊肾病上皮细胞,是出自常染色体现性多囊肾病患者的肾上皮细胞系,这类细胞在体外研究里,常被用来模拟囊肿形成以及上皮异常增殖过程,该细胞系的典型特征,是保留了与疾病有关的基因突变背景,知晓该细胞系的基本属性,是展开相关功能实验的重要先决条件。
什么是WT97人常染色体多囊肾病上皮细胞
WT97细胞源自多囊肾病患者的肾脏囊肿上皮组织,是经过体外分离以及永生化处理才得以获得,该细胞系携带着PKD1或者PKD2基因突变,它能够稳定地重现多囊肾病里上皮细胞过度增殖液体分泌异常以及细胞极性改变等关键表型,跟普通肾上皮细胞相比较,WT97在培养过程中更容易形成相似囊肿的三维结构,所以成为研究囊肿发生机制的常用模型。
WT97细胞培养时要注意什么
培育WT97细胞得用专用的上皮细胞培养基,一般要添加生长因子以及适量血清。细胞是贴壁生长的,呈现出典型的上皮样形态,传代的时候推荐用胰酶替代物来维持细胞活性。要留意控制融合度在70%至80%进行传代,过度密集会致使细胞自发形成球状结构。另外,该细胞对机械力比较敏感,换液和加液操作应当轻柔,防止冲起单层。
WT97细胞适用于哪些实验方向
最常用于囊肿形成机制研究的该细胞系,比如评估候选分子对囊泡生长所产生的影响。借助三维培养模型,能够量化囊肿数量以及大小。另外,WT97也适宜观察上皮间质转化相关指标,还有检测离子通道活性。因为保留了疾病遗传背景,所以还能够用于基因编辑实验,以此验证特定突变的功能。然而需要注意的是,该细胞增殖速度依个体差异较大,建议每一批次都进行基础表征。
如何验证WT97细胞的实验有效性
进行实验之前,要借助短串联重复序列鉴定来确定细胞身份情况,以此防止出现交叉污染现象。与此同时,需要检测那种标志蛋白的表达,像是PKD1蛋白的水平或者纤毛结构属否存在异常情况需要检测。进入到三维培养阶段的时候,建议去设置阳性对照(比如已知的促囊肿因子这种)以及阴性对照。再去记录每一孔的囊肿形成率以及平均直径大小,要重复三次以上这样子才能够保证数据的可靠性。等到冻存的时候,要使用含有二甲基亚砜的冻存液,然后放置在液氮当中进行长期的保存。