在细胞分析里头具有核心工具地位的流式抗体，它的挑选以及运用，直接对实验结果的精确性与可重复性产生影响。本文会针对存储、荧光标记以及对照设置等关键环节，去梳理实际工作期间最常碰到的疑问，以此助力您迅速掌握流式抗体的标准操作要点。
流式抗体如何正确保存
收到流式抗体之后，首先要去确认产品说明书所提及的存储温度，极其多数的抗体都应该在避光的情况下，保存在二至八摄氏度的环境里，绝对不能进行冷冻，原因在于冻融这种情况会致使抗体蛋白发生变性，从而形成聚集体，进而增加非特异性染色，每一次取用之后都一定要把瓶盖盖紧，还要避免产生气泡，要是长期保存的话，可以考虑分装成小份，以此来减少反复冻融对于稳定性所产生的影响。
倘若抗体和荧光染料进行了偶联，那就必须格外留意避光的条件。平常的时候，可以把抗体管用铝箔去包裹起来，或者放置在抽屉的内部，在经过短时间光照实验之后，要马上把它放回黑暗的地方。针对某些对于光线极其敏感的染料，像FITC、PE等这样的，建议另外去使用含有防淬灭剂的缓冲液，并且在整个染色的过程当中，都要维持弱光环境来进行操作。
流式抗体的荧光标记怎么选
首要考虑流式检测仪的激光配置来选择荧光标记，比如说，488nm蓝光激光器与FITC、PE等次染料相匹配，而640nm红光激光器适用于APC、Alexa Fluor 647等。其次，要对目标抗原的表达密度展开评估：低表达抗原得选择明亮度高的荧光染料像PE或者APC；高表达抗原能够选用相对较弱的FITC或者PerCP-Cy5.5。
多重染色方案里面，还要避免荧光光谱重叠这种情况。建议先借助光谱查看器，去检查各个染料的发射波长，看是否存在交叉，要是有必要的话，使用补偿微球来进行单染管补偿调整。与此同时，要注意给串联染料做标记，像PE-Cy7的时候，缓冲液当中不能含有固定剂，不然的话，很容易引起染料降解。
流式抗体实验对照怎么设置
任何流式实验都必定得含有未染色对照，这是用来确定自发荧光水平以及设置阴性门的，此外还需要同型对照去评估抗体的非特异性结合，也就是要用与目标抗体一样的亚型、一样的浓度但特异性无关的免疫球蛋白，对于高背景样本而言还能够考虑使用Fc受体阻断剂，它能够有效地降低巨噬细胞等细胞的非特异性吸附。
用以准确划定阳性群边界的荧光减一对照，是在多色方案里每次缺失一种抗体，当使用串联染料时建议联合判断单染补偿对照与FMO对照，对照管与实验管得使用同一批次细胞，染色条件、洗涤次数以及采集电压必须完全一致，如此方能保证门策策略的可靠性。
