我实验室的酶标抗体选择困难症
上月才初次碰到酶标抗体之际，满心茫然。那被辣根过氧化物酶所标记的，还有被碱性磷酸酶所标记的，究竟该如何去挑选？
当时第一反应是——这个东西真能帮我看见我要找的那个蛋白吗？
实话说来，头一回看资料时全然处于懵逼状态。这项技术乃是在1966年由一个名为纳凯恩的人完成的。所说的事情为，将酶粘附于抗体之上。
然后，就如同侦探一般的酶，跑到与之对应的抗原之上。一旦碰到底物，它就会改变颜色展示给你看。
听起来挺简单？真的上手的时候踩坑无数。
酶标记抗体能帮我存钱吗
这个问题你必须关心——老板说经费有限，别老买贵的试剂盒。
我查了下，直接法就是把酶直接粘在一抗上，看着简单。
步子较少，不是特别容易出现差错。然而存在一个极其要命的短处：一个抗体仅仅能够粘贴一个HRP分子，灵敏度是比较低的呀。
记得那个时候做免疫印迹法，依照着直接法的实验方案去操作，然而得出的条带淡得仿若根本就没出现过一样情况。老板瞅了一眼之后说道：这样的结果能够用来撰写论文吗？
唉。
辣根过氧化物酶标记抗体到底怎么做的
过碘酸钠法：用化学剪刀做裁缝
原理其实就是把酶剪开再粘起来，像裁缝一样。
处于HRP分子之上存在着糖基，借助过碘酸钠将其剪成醛基，此醛基跟抗体之上的氨基相结合，进而形成Schiff氏碱，最终运用硼氢化钠把它固定好。
听起来很专业吧？但在实验室里要精确控制，不然就做砸了。
那年，我们实验室做这个，温度没把控好，直接将一批抗体报废了。被烧掉的试剂费用，足够支付一个月的食堂餐费。所以讲，关键的温度、pH值以及时间难以把握清楚，一旦一步出错，就会导致全盘皆崩。
戊二醛二步法
戊二醛做中间人，把酶和抗体拉在一起。
不过后来同事跟我说，这个老古董法容易让抗体失活。
碱性磷酸酶标记抗体到底值不值得买
AP在样本里干扰少，背景干净。
特别做ELISA检测pg级的微量抗原要用到它。
直接法好还是间接法省钱
间接法是用二抗来放大信号，步骤多了一环。
但理论上灵敏度能提升10到100倍！
比如说，你对血清里的某一个因子进行检测，在细胞实验里这个因子相当关键，而在那个浓度极低的工作液当中，此前根本就检测不出来。
接着变换成了间接法的策略，增添了酶标二抗，果真在对目标分子进行大规模检测之际才出现信号。
马上便发觉，此思路无疑是颇具效用的 ，尽管于进程当中 ，增添了二抗这一要素后 ，更易于染上那些杂乱的影像。
酶标二抗能实验通杀吗
以间接法而言，仅需一种标记二抗，如此便能省下针对每种一抗自行单独标记所需的费用。曾有一回，于学校实验室进行一抗的不同种属检测工作，几乎动用了所有兔源的一抗，然而实际上，仅使用一种抗兔二抗便将此项工作完成了。
省了标记15种抗体的时间和破财的标记费用。
当然，这样做的代价就是容易跟一些杂蛋白结合。
新手必看：避免常见错误
我当初是生手，没人指导就拿TMB直接当OPD的底物用！
结果呢，HRP因遇上不合适的底物从而没了信号，整整一天的样本白忙活了。之后查看底物的供氢体，特别是ABTS受某些试剂影响，这才弄清楚。
还有一点，样本必须用可靠的保质期内的化学发光液。
酶标记抗体要怎么保存才能不浪费
配抗体挺贵的，得保存好。
HRP标记的抗体对于反复冻融现象极为惧怕 ，老板指导我采用甘油进行分装操作 ，之后放置于零下二十摄氏度的环境。需要留意的是 ，尽量不要添加叠氮钠 ，不然会直接致使酶被灭活。
其保存步骤并非十分繁杂，然而工作量实际上并不轻松，总归是比在末尾让全组预算就那样搁置在冰箱里且坏掉要好得多吧，对吧。
恒温箱里突然断电
真是无话可说了。半夜时分给恒温箱断开了电源。酶标板放置在里面持续孵育了好长一段时间。第二天清晨过来查看。发现所有的板子呈现出的都是一种怪异的色彩。那些本应有重复信号的孔位全都乱七八糟的。
然而，最终白白耗费了一周的时间精力劳动付出。仍旧是得斟酌选出恰当适用的酶标仪，还要保障试剂所处于的温度维持在标准化状态。
组合底物出奇迹
直接法灵敏度不够，间接法又耗时费事。
有人说试试其它技术路线，例如预孵抗体之后再和抗原组合。
果然得到一个比较稳定的显色梯度。
就在那一刻，我喊出了一声“终于……”，结果却被同事责骂太过愚蠢，可实际上我的心里真的是感觉非常爽。
科研就是跟自己过不去
没有完美的实验，跟酶标记抗体打交道就是闹心。
可是着实讲，一旦察觉到能够借助此项技术去答复关键性的科学问题，纵使内心崩溃，依旧会紧接着下一步持续开展进行。
若是你才刚开始入门，不要被那些花哨繁杂的原理给吓退。先弄明白你所检测的目标浓度，以及手上所拥有的经费。
想要快就选直接法。
要是追求灵敏度，别犹豫就是用间接法吧。
大不了像我一样，失败几次就知道该怎么选了。
实验不易，共勉吧。
