你养的真的是你想养的那个细胞吗?
深夜时分时,我目不转睛直直盯着显微镜,刹那间我忽然冒起冷汗来,这细胞,怎么和从隔壁实验室借来的那一瓶长得愈发相像了呢?
细胞养了五年,有三个人先后接手,还发表了三篇论文。要是这是错的,难道我应该去撞墙不成?
更可怕的是,它可能一直就是错的,只是我们谁都没发现。
咱们聊聊STR鉴定这事,不吹不黑,就聊聊身边的坑。
假细胞到底有多猖獗
“我们实验室从来没出过问题。”
这话我听过的次数不少于八百遍,直至有人查看了手头的HELA,发觉根本并非HELA。
信不信由你哦,全球范围内,存在着如此一种状况,大概百分之二十到百分之三十的细胞系,其身份被错误认定了,亦或是有别的细胞悄悄混入其中了。
这不是偶发情况,简直防着都没用。
细胞交叉污染比你以为的更常见
你去问问身边做细胞实验的同行。
倘若那位同行给出的回应是“我思索一番啊,似乎……”,那么基本上能够判定他出现状况了。
造成细胞被污染的缘由绝非细胞自身不老实,完全是操作方面引发的问题:存在好几个细胞一同进行传代操作的情况,在本应更换吸管的情况下,未更换吸管就直接伸进培养基里,在将细胞进行液氮保存时,标签出现弄错的状况,而最为致命的是,细菌污染是能够被肉眼看到的情形,交叉感染却是根本无法看见的状况。
它悄无声息来得更快,防不胜防。
很多人根本不知道自己的细胞已经不纯了,还在那埋头做实验。
一个细胞错了,三年白干
2011年有个轰动全国的事。
有一个完整的研究组,自1988年起,便采用方式有误地对待细胞系,将其当作另外一种来持续使用。
几十年啊,发了几十篇论文,全白干了。
你来思考一下,若你发觉这些年来所进行的实验全部不对,将其归纳整理成报告呈递给老板,当他看到的时候,他会不会瞬间吐血呢?
太可怕了,我吓一哆嗦。
科学圈怎么看这个事
这些年靠科研吃饭的人都学聪明了。
很多高水平期刊投稿前,都必须提供STR数据,否则直接退稿。
说白了,你不验明正身,别人就默认你有问题。
就连那些,在国际上处于顶尖水平的杂志,自2015年起开始,也全都要求,在上面必须提供鉴定证明。
在发表之后,申请课题之前,传代超过几代出去之前,项目刚启动之前,验证时间到什么时候呢,不管获得的时候呈现怎样的状态,都必须要验。
一句话:只要养了,就得验。
别嫌麻烦,出事才最麻烦。
听起来高大上的STR鉴定,到底怎么操作
“STR”所指的是“短串联重复序列”,简单来讲,它是那些在人体内重复出现的,呈现为小片段形式的DNA。
各自的这些小片段排列情形不同,好似指纹那般,你的细胞同样存在专属条码。
鉴定流程实则并非繁杂:先将你细胞之中的DNA予以提取,而后对你的特定片段进行扩增,再放置到机器之上予以检测,对照权威细胞数据库逐一进行对比,如此便能够知晓你的细胞究竟是属于谁的。
实质上,这是要针对每一个细胞去开展一回身份验证的操作,并且还要给予它一个绝无仅有且完全独特的身份证。
很多以为搞定了,其实什么都没
那种认为能够一劳永逸的想法是错误的,细胞于培养进程之中有可能出现“基因漂变”,先前的STR图谱或许就会逐渐变得愈发不同了。
所以,以下这些关键时刻都得做鉴定:在刚拿到细胞的当天就要做,在做实验超过第 10 代的时候又得做,长期保存之后准备复苏时也需要做,在实验结束时或者发论文之前同样得做,当细胞表型或者形态出现了变化时得做,细胞经历耐药实验之后还得做。
这是给大家总结的时间表,照着做准没错。
怎么看懂鉴定报告
实际的鉴定结果是很容易一眼就看明白的,“匹配度达到百分百”这一情况意味着是完全相同的、没差别的,而要是“在某个位点出现了一对以上”,那就得谨慎地注意是否存在污染的状况了。
普遍而言,当处于大于或等于百分之八十的匹配程度时,算是尚可的状态,而要是处于小于百分之八十的情况,那么就极有可能存在问题了。
“没有匹配到结果”,这是最为麻烦的情况,或许仅仅是数据库未曾收录你的细胞,然而也有可能则是表示你所熟知认识的它绝对不是同一个。
常见误区避坑指南
别觉得有了支原体检测就能够去替代STR鉴定,这压根就是完全不同的两码事,支原体检测所查验的是污染情况,STR鉴定所查验的是身份信息,谁都没办法去替代谁。
千万别以为原代细胞就无需鉴定呀,新构建的细胞在最初之时就迅速提交至共享数据库,这对整个科研领域都是有好处的,是有益处的,能起到帮助作用的。
更为关键相当重要的一点在于,STR鉴定并不能够全然彻底完全替代其他的质控方法,于是需要将其与核型分析这类方法联合起来一同使用。
我来替他们辟个谣
对细胞进行STR鉴定,并非仅仅是去检验DNA,最为关键的是,它能够去发现细胞与数据库里所呈现的标准结果是否达成一致。
当细胞被另一种掺和了,在借助STR并且与权威库进行对比之际发现完全不相符,便能够马上进行定性判断。
若是有某些别样的细胞偷偷地混入,那么图谱当中就会同时呈现出好几种不一样的峰,马上就会暴露。
·交叉污染无所遁形。
做一次STR鉴定需要准备什么
样本需满足的要求事实上并不复杂:有一瓶细胞所处生长状态呈现为良好的状况,或者存在一管细胞沉淀,其数量大约处于百万级别的程度便可行。
打算去寄送样本,送去之时是比较便利的,径直送去,送到距离你最为接近的检测单位便可,采用普通快递是没有问题的。
全过程大约历经五个工作日上下,一份周全的检测报告将会经由邮箱发送给予。
在图上,写着分型结果,还写着位点列表,并且写着匹配度数据,使得任何一个人,都能够看懂。
写在最后
开启做实验之始,我亦感验DNA为颇为遥远之事。如今回首瞻望,诸多时日的泪水与怀疑,俱化作科研路途里最具价值之一课。
STR鉴定并非是额外加之的一种负担,而是属于我们去做实验之时必须要详尽履行的本分职责,不然的话又能够凭借什么去为那些已然牺牲的细胞承担起责任呢?
每一次认真的身份验证,都是对过去投入的时间的尊重。
毕竟细胞没有错,错的是我们太相信自己是那个不会出错的人。