有人说你靠它吃饭。你真靠它吃饭。
第一次，拿到上皮细胞完全培养基的那天。感到兴奋，又有着害怕。恰似第一次抱孩子那般，你不会抱，然而却不得不抱。
但孩子不活，钱就白花了。
我养的第一瓶完全培养基，配比就没调对。
90%基础培养基＋5%血清＋4%添加剂＋1%双抗。
这是普诺赛的经典配方。我照着做。结果细胞还是死了。
后来才知道，不同厂家的基础培养基不一样。
有的成分全然不一样，举例来说，存在一些厂家，他们选用DMEM/F12当作基础培养基，而另外一些厂家，则选用RPMI - 1640。
所以买的时候先别急，千万别一上来就直接配。
培养基怎么选
网上讲，上皮细胞完全培养基存有专门之“柱状上皮细胞培养体系”，其适用于人这类哺乳动物，也适用于大鼠这类哺乳动物，还适用于小鼠这类哺乳动物，也适用于兔这类哺乳动物。
听起来很全是不是。
但你的细胞不一定是柱状。
同一个上皮类别，肺内存在的是纤毛柱状状态的上皮，肾内包含的是成为立方形态的上皮，消化管拥有的是单层柱状样式的上皮。
若是你身为人类角膜上皮细胞，那就还需要去购置专用的才行，就如同富衡PY - H143那样的。
太细了。
这种细节折磨人。
哪个品牌好
我用过普诺赛的EpiCM。确实不错，开瓶就能用。
成分的检测得出的结果也都处于合格的状态，细胞生长的情况还算可以，内毒素被控制在了3 EU/mL的水平之下。
而后，也尝试过iCell原代上皮细胞培养体系，这一整套，是更加便宜的，其全部的500ml，仅仅只要四百多块钱。
便宜没好货？不一定。
那一个体系之中的添加剂数量众多，然而你必须依据比例进行分装，绝不能够随意而为，其中有些添加剂要放置在零下二十摄氏度的环境，有些则要放置在四摄氏度的环境。
有一次我放错冰箱了。
没办法，倒了重配。
细胞老了怎么办
代数这个概念，以前我不当回事。
超过20代后，细胞增殖会明显变慢、形态变差、功能也不行了。
但有的人坚持用到30代。这就是赌。
细胞状态特别好的，就多冻存几管。
别等它完全老化。到时候什么都没了。
配好的完全培养基怎么保存
这个问题坑过我好几次。
普诺赛讲，调配好的全然培养基有效期限为3个月，然而却一定要放置到2至8摄氏度的冰箱之中。
可有些成分不一样。血清、添加剂要放-20°C，你别搞混了。
开封之后的，处于完全状态的培养基，最好在一个月之内将其用完，因为一旦时间变长，那么其中的生长因子就会失效了。
有一回，我配制了一瓶全然的培养基，使用了两次之后，便搁置在了外面，随后忘却了，再度拿出来时，其颜色已然变黄了，pH值全然不准确了，只能丢弃。
这就是代价。
换液和传代
换液别太勤，也别太懒。
一般每2到3天换一半就可以。
细胞不贴壁怎么办
原代上皮细胞经常不贴壁。这问题特别烦人。
后来我发现，不是培养基的问题。是耗材不过关。
普通的那种塑料培养皿，其表面呈现出疏水性的特质，上皮细胞所含有的整合素没办法有效地去结合，于是细胞就那样飘在那个地方。
人不会贴壁，自己贴不上当然活不了。
你需要的是TC处理的耗材，就是表面做了亲水改性那种。
有的更需要包被。比如I型胶原，或者多聚赖氨酸。
究竟具体包哪一种，这得看你所养的是何种细胞。肾上皮细胞对于钙离子浓度是存在偏好的，气道细胞在对无血清方面的需求更为强烈。
没有统一答案。
细菌污染，肉眼就能看出来——培养基浑浊了。
但最可怕的是前期没看出来，等养了两周才发现。
切莫运用抗生素去将它遮掩，抗生素要是反复运用，就会致使耐药菌株缓缓生长出来，还会把支原体的感染给遮掩住。
完全无菌不是口号。真的遇到污染，请马上扔掉并清空培养箱。
莫要存有舍不得的心态，倘若珍惜钱财，那便需要将污染遏制在起始初期阶段，切勿使其扩散至其他细胞。
细胞污染急救
在操作台当中进行配药，还要配制完全培养基，整个过程都要在超净台进行无菌操作。时间不能超过15分钟，否则细菌就有可能掉进去。
移液枪和无菌的耗材必须用全新的。千万别用旧的。
特别需要留意的是：不同的细胞系得进行分开的操作，各个细胞系所专门使用的移液管以及培养基之间不能够进行相互使用。
交叉污染，是实验室最常见的，也是最容易防止的。
上皮细胞完全培养基怎么复温
这个问题很小。但很多新手犯错。
我所使用的是普诺赛的培养基，此前此培养基一直放置于冰箱之中，将其从冰箱取出后便直接加入到细胞里，结果细胞冻死了一半。
不能这样。
从冰箱拿出来，放室温下半小时到一个小时，手摸不冰了就行。
再者是采用37°C的水浴方式进行预热，然而务必万分留意，若是进行反复加热的话，将会致使生长因子失去效用。
太热也会失效。
这就尴尬了——又要加热，又不能过热。跟照顾孩子一样难伺候。
瓶子的坏习惯
有时候，培养瓶重复灭菌用——那是老板省钱的办法。
如果你在做贴壁细胞，千万别这么干。
重复灭菌的玻璃瓶表面有细微划痕。细胞在划痕处根本贴不住。
仅仅于光滑的区域进行黏附，仔细思索一下，一整个平面当中仅仅只有一半的区域是能够实现生长的，其密度并不均匀，死掉了数量众多的个体。
还是买新的TC处理瓶吧。再穷也别省瓶子。
肉眼判断培养基质量
这个技巧抄下来很有用。
完全培养基新鲜的时候，颜色是透亮的橙红色。
如果它变紫色？pH值偏碱了。
如果变黄？那就有问题了——要么被污染了，要么代谢过旺盛了。
有时候并非是发生了变质，而是由于细胞培养数量过多，进而产生了过多的酸。然而，在多数情形下，仍然是出现了污染的状况。
你就记住：正常是不深不淡的玻璃样橙红色。别的颜色都有问题。
双抗的反作用
很多人听到“双抗”，就以为是万能的保护神。
不是的。双抗只是一道限度的防线。长期依赖它会让你麻痹大意。
培养基加了双抗，不等于能省去无菌操作。
有些完全培养基是开瓶即用的，不需要额外加双抗。
你别多此一举。乱加反而会改变渗透压，让细胞活不成。
培养箱的坑
较通常的培养条件，乃是37摄氏度、5%的二氧化碳浓度、采用水套式结构的饱和湿度。
但你以为这个设定能自动工作吗？
不可能。
培养箱湿度低的情况较多，湿度一旦降低，蒸发便会加速，因而培养基浓度增大，进而使得细胞受到影响了。
因此每隔几个月，那用于恒温培养的箱子的湿度传感器必定要去查看，水盘当中的无菌水是否已满了呢。
有一回，我忘掉加水，径直进行了两个细胞系的实验，而且是干烧状态下的，三天之后才发觉，损失可太大了。
上皮细胞完全培养基，性价比怎么算
不是越便宜越好用的。
好比富衡生物所拥有的上皮细胞专用培养基，相较于进口的而言，便宜幅度在百分之三十到百分之五十之间。
代购进口货，关税和冷链运输都很贵。
然而并非讲国产便绝对优，你需先进行免费试用，或者购买少许来测试，之后再去做决定。
别一次买十瓶。先测一瓶。确认细胞状态好了，再放大培养。
自己的成本自己把控。
上皮细胞培养基能做什么研究
人体有着相当重要的器官，比如说肺，还有肾，再就是肝，另外还有胰腺，以及皮肤，这些都属于由上皮细胞共同构成的。
如此一来，你借助上皮细胞完全培养基，培育得出的细胞能够用以开展诸多事项，诸如疫苗方面的工作，药物筛选的操作，致病机制的研究等等。
但它只供科研用。你不能用它在临床上诊断或治疗。
所有产品说明书里都会写——本产品禁止用于临床诊断或治疗。
这是每一个实验人员必须遵守的规则。
真诚地讲，上皮细胞完全培养基这个玩意儿，要说它难吧也并非难到不可逾越，要说它简单吧，嘿，其中存在的问题可着实不少呢。
你购得了正确的配方，获取了经TC处理的瓶子，把控住了换液以及传代的最佳时间，细胞便会规规矩矩地贴壁生长。
最害怕的便是不相信邪乎之事，不相信说明书上所写内容，不相信其他人的经验经历，非要凭借自身去进行摸索探究。
科研成本就是这样变高的。
实验室的最后一条法则——
细胞不能骗人。你精心对待它，它就给你好结果。
在你糊弄它好些时候的情形下，它不会以死来向你展示，仅仅是生长速度迟缓、呈现出的状态欠佳以及实验无法重复得出结果，最终依旧是将问题抛给你。
算了，我又在自言自语了。
明天还有新一批完全培养基要配。就先这样吧。
