有时候我会盯着显微镜发呆，觉得这台机器挺蠢的。我说真的。
在一秒钟之内对几万个细胞予以处理，完全依靠抗体去进行辨认，一旦认错其中一个，后续所有的工作就都白费了，这情形极其类似每天都进行选择题目作答的我们，要是选错了那就彻底失败了。
一滴溶液里的信息战
我步入实验室的那会儿，师姐递给我一支流式抗体，提及：“这支临近过期了，拿去当作练习的对象。”它是由FITC标记的，呈现绿色荧光，仅仅就这么一管，那个月的饭钱都付诸东流了。
别发笑，这东西着实价高。一支就够我吃上一个月的食堂饭菜。因而每次开启新的管状物，手都不由自主地颤抖，哪怕稍微摆弄一下都内心惊恐万分，胆战心惊。
不做好这件事，后面的实验都白做
网上讲进行“抗体滴定”乃是基本功，我一直以来觉得要不然就浓度高些，信号强一点会更稳当，直至被现实重重打脸。
浓度处于过高状态，背景脏污得仿若马赛克一般，出现了炸裂情况。那些已然死亡的细胞相互黏连在一起，假阳性现象四处泛滥。浓度处于过低状态，任何信号均无法被看见。恰似没佩戴眼镜外出，看谁都显得模糊不清。而处于中间位置的那个最佳点，基本上是依靠缘分。
之后才晓得，这恰似做饭时投放调料，多些许便会过于咸口，少些许便会欠缺味道，说明书里所给出的推荐量仅是一种大致的情况，更换一批细胞，更换一台仪器，全然是不一样的，必须得自己去摸索。
克隆号是什么东西？
我发现有人做流式只看防伪标的靶点，从不管克隆号。太天真了。
有着两个不一样克隆号的抗体，有可能其中一个能够识别出来，而另一个却毫无反应。我曾遭受过这样的挫折，花费俩周前去进行验证，后来却发觉自己所拥有的抗体根本无法识别实验所采用的样本种属。就在那一瞬间，心态彻底崩溃了。
某位师兄所言极是，克隆号恰似人的身份证编号，向外看去皆是“抗CD4抗体”这般称谓，实则每个人的指纹皆不相同。若不查看克隆号便盲目购买，等同于相亲时不瞧照片仅看名字，众多“张伟”等着你来拆盲盒。人生给出建议：需避雷此项。
后来我发现了一个“隐形杀手”
从前一直感觉实验得出的结果处于不稳定的状态，更换了抗体之后依旧没有起到作用，将样本重新去做，染出来的图呈现出糊成一团的样子，反复查看却不清楚究竟是哪里出现了问题。
后来有一回，去听了一场讲座，在讲座上，有位专家这么讲道：“你所面临的这种状况 ，极有可能是 Fc 受体 ，并未妥善封闭所致。”。
恍然大悟。
恰似你怀揣敲门拜访某人之心意，怎料邻居纷纷涌来与你握手并合影留念，致使你于门口无论怎样呼喊都无法传进去。未封闭 Fc 受体的样本呈现的便是这般状况，抗体捕获了本不该捕获的细胞，最终所获数据混乱如一团迷雾。
做板子就像搭乐高
现今的流式抗体已然是“直接染色”这种形式了，无需去弄两步法那般繁杂的操作。然而要是想在一个试管当中同时对十几个指标展开测定，那依旧是得耗费心思的。
需要计算好每一个荧光染料的光谱是否会产生冲突碰撞，对于那些抗体表达较弱的情况就要搭配强荧光，而抗体表达如果较强那就搭配弱荧光。这就如同穿衣着装一般，绝不能让颜色之间的冲撞达到让人绝望的程度。
我常常将FITC、PE、APC这些视作基础颜色，其余的再去查阅文献瞧瞧别人是怎样搭配的。不要老是觉得自身能够创新，新手最好切勿异想天开，不然后期数据分析的痛苦唯有自己明白。
有意思的那个微球
我于行业展会上目睹过一项新技术，此技术乃是运用荧光编码的微球来开展检测。实际上，这便是将流式抗体固定于微球之上，进而组建起一支“抓捕大队”，该大队能够同时对几十个因子进行检测。
这算不算流式抗体玩出了新花样？我觉得算。
这情形犹如安排机器去分辨各异颜色的乒乓球，只要你将“标签”精准粘贴，它便能够为你协助诸多事务。往昔测试一项指标就得开启一管，如今一管即可达成全部。这算得上是我们此行业的一种降低成本提高效率之事了。
一段不起眼的日子
有一阵子我每天就是在调电压、配抗体、等机器跑数据。
不小心把抗体洒了。半年工资没了。
身形疲惫之际能觉得特别乏力没劲，那个装在深色小瓶子里头之物，看上去跟墨水毫无差异，然而它能够于悬液当中识别出那个我所期望的细胞，把它从茫茫人海里提取出来，这听着稍微有点类似警察办理案件，抓捕的正是那个“正确之人”，而在科学研究里面，这个“正确无误的细胞”有可能性隐藏着破解某种生物学奥秘的关键重要信息。
总结一下我这几年踩过的坑
说明书只是一个参考基准。真正的最佳浓度，是自己滴出来的。
不要小看克隆号，也不要漠视Fc阻断，要是这两点出现差错，那后面所有的图都不过是自欺欺人罢了。
多种颜色进行配色时，要多多去瞧瞧其他人是怎样搭配的，去啃文献并非是一件丢人的事情，而丢人的则是所得到的数据根本没办法作出解释。
虽多因子检测有着便利之处，可抗体以及微球的质量是需要去证实的，它将你的便捷予以扩大，同时也会把你的失误进行扩大。
