当题目被写出来之际,我彼时正蹲在四号超净台的前头,眼眶呈现发酸的状态,并非源于伤心,而是由于没睡够!
凌晨两点,PCR仪还在那滴滴响,走廊里就剩我一个人。
手里攒着这管荧光定量PCR试剂盒,想了一百遍值不值得。
实质上你们大概并不清楚,那感受如同发薪水那日思索要不要购置一杯奶茶那般,纠结到了极点。
你心里门清——好几千块钱一盒的东西,做得再好也不能当饭吃。
但要是没它,实验就做不下去。所以躲不掉。
通用型到底有多“通用”?
翻过很多篇技术文章,比如翊圣生物那款能检测4重呼吸道靶标的,诺唯赞的预混液带UDG防污染系统,还有一份仪器对比的文献说检出限能到单拷贝。
数据真好看。但我蹲这儿想的是另一个问题。
前阵子实验室搬来一个学弟,啥也没说就拆了一盒通用型试剂盒。
等我看到的时候,缓冲液已经被反复拿了三四次。
真是头疼啊。
我当时就想骂人——但又没真骂出口,因为我也这么干过。
人性就是这样,免费的或者不用自己花钱的东西,没人当回事。
通用的试剂盒,就因为谁都能用,反而最容易被糟蹋。
为什么会有这种东西?
通用型PCR试剂盒说穿了就是一个啥都能干的反应体系。
翊圣的介绍表明其可兼容病原微生物、人源基因组、植物等多物种核酸检测,去询问翊圣的客服,他们会列举实例,称动物植物病毒DNA均可进行检测。诺唯赞那边标注着能在各种qPCR仪上通用,且能兼容高GC含量模板,从30%至70%均可实现扩增。翊圣的产品资料里存有一个数字,即冻融十次酶活不会降低,运输六天仍能保持稳定。
说实话这些指标非常硬。
但我的想法有点不太一样。
我们越来越依赖“通用”,是不是因为在逃避学习?
当跑胶老是跑不出东西之时,难道最初的反应难道不是认为“试剂盒不好”,而非去反思——自身的体系是否存在问题吗。
我现在越来越觉得,通用型试剂盒的存在,不只是因为它好用。
是因为我们越来越懒,不愿挨个摸索,不愿试错,只想要现成的。
灵敏度其实是个坑
翊圣的那款被称作预混液的产品,有着针对4重呼吸道的检测功能,其灵敏度标注为每毫升250拷贝,对于低浓度RNA样本,它的检出限更低,存在一些产品能够达成0.1皮克的水平。
实验并非做不出来,然而,在实验结束之后,每当注视那荧光曲线之时,我都会感到心慌意乱。
信号是出来了,我就开始想——这是真阳性还是非特异性扩增?
在他们所进行的多重检测当中,翊圣曾展现过4重靶标同步扩增,且这些扩增彼此之间不会产生相互干扰。另外,诺唯赞还着重指出,UDG防污染系统能够于室温的环境条件下,将气溶胶污染予以消除。
但这些是实验室的数据。
到你自身手上了,你模板的纯度,你引物设计的水准,你退火温度的设定,全都将会产生影响。
通用型是个好底子,但别指望它帮你解决所有问题。
冻了又化,化了又冻
十次反复冻融还很稳——这个数字我看的时候真觉得佩服。
可实验室之中那扇冰箱的门,整日不间断地开了又关,关了又开,究竟谁能够确保这试剂始终都处于稳定的状态呢?
有些师兄穷惯了,一管试剂恨不得用半年。
现在想想真是后怕。
国产品牌能打吗
弄国内通用PCR试剂这一块的代表队伍里,有翊圣这家,还有诺唯赞这家,另外还有全式金这家。
在论坛之上有人提及,全式金所拥有的PCR产品,能够与日本的TOYOBO进行一番实力较量。诺唯赞的那款Taq Pro HS产品,属于新一代热启动酶,其是经过抗体修饰的,具备对模板有较高亲和力的特点,同时对杂质有着良好的耐受性,其。
Bio-equip上面有一篇文章专门针对通用型与专用型的可靠性差异展开了讨论,通用型国产单次反应成本大约在8至25元之间,它适宜高通量的科研探索,然而却不适合常规诊断。
性价比确实高。
但有些实验还是得老老实实用专用型。
比如说,那些对灵敏度有着极其严苛要求的情况,或者,那些样本存在特别繁杂杂带的状况,相较于其他类型,专用型会显得更为可靠一些。
操作是真方便
翊圣C203P1属于二乘预混液,添加引物、探针以及模板便能够进行相关操作,采用一步法来做逆转录以及qPCR。
诺唯赞的ROX适用范围广,不用在不同仪器上调浓度。
翊圣的快速程序那边能30分钟跑完48孔。
省时间是真的,方便也是真的。
但方便的另一面,有时候暗示这东西不精确。
这是偏见,我知道。但也挺真实的。
污染靠UDG能解决吗
诺唯赞和翊圣的这个产品线都加了dUTP加UDG系统。
在室温的状况下,具有热敏特性的UDG能够将含有尿嘧啶的污染物予以降解,一旦加热到五十摄氏度之后它自身便会失活,并且不会对扩增造成影响。
理论上说得通。
情况是这样的——只要开启盖子的次数较为频繁,或者移液枪没有经过校准,那么污染仍旧是有可能出现的。
UDG是解决产物污染的好办法,但不是万灵的。
纠结的总结
说到底我还是搞不清楚,通用型PCR试剂盒到底值不值得买。
它在兼容性这一方面实际是相当强的,针对于多数仪器而言其适配能力也是足够的,稳定性同样得到了增强,在防污染方面也取得了诸多明显进步。
对于经费不多、什么都要做的实验室来说,确实是救命的东西。
但试剂盒只是工具。
不管通用还是专用,最后活还得人干。
做实验是这样,很多事情也是这样。
我们总想找一个万能的答案,然后躺着等结果。
哪有那么好的事啊。
……
时间已经来到凌晨两点半,仪器发出的响动声音又停止了,我心里想着应该回去了,明天还需要做一个对照实验,以此来验证一下今天所得到的结果是属于真阳性,还是属于我自己弄出来的毫无价值的东西。
就这样吧。
说起来——
你们实验室用哪家的通用PCR试剂盒?
效果怎么样?下次该换牌子吗?